双通AAO模板

实时荧光 PCR 技术：比你想象的更丰富！

光基团和淬灭基团距离很近，使得荧光基团发射的荧光被淬灭。 随着 PCR 的进行，Taq 酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其 5'-3' 外切酶活性会切割探针，释放的 5' 端报告基团游离于反应体系中，它不受 3' 端荧光淬灭基团影响，荧光信号就可以被仪器检测，积累荧光。也可以说每扩增一条 DNA 链，就形成一个荧光分子，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成同步。该技术目前应用较为广泛，包括人或动物病原体检测、生物制品鉴定等领域。 图三. TaqMan 探针作用原理 双

定量PCR常见问题及策略你知道多少？

Q1．无CT值（信号）出现 1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。 2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。 4.引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。 5.模板量不足。对未知浓度的样品应从

献给初学者：一文看懂 PCR 结果图

辛辛苦苦提完 RNA，逆转录后一个个孔加完引物和模板，最后进行 RT-PCR，你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了？等到一幅下面这样的结果图，不知道对于刚接触 RT-PCR 的你来说内心是否是崩溃的？这是啥？怎么看？别急，让我慢慢跟你介绍，看完后你就能准确的分析出你的 RT-PCR 结果了。（这里以 7500 软件为例进行介绍）1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。如果没有设置好的话是需要