简介
RIDA 黄曲霉毒素免疫亲和柱(产品编号:R5001/R5002)
黄曲霉毒素免疫亲和柱为检测食品饲料中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2 及M1含量的样品前处理用提取柱。
柱子特别适合处理较难提取的样品,如调味品,花生,干果,儿童食品(牛奶与谷物的混合物)。
R5001 含10支黄曲霉毒素免疫亲和柱
R5002 含50支黄曲霉毒素免疫亲和柱
凝胶悬浮物:琼脂糖(凝胶)
抗体: 单克隆抗体结合在
最大进样量: 60ml
流速: 1滴/秒
检测限:取决于进样体积及检测方法(草药,调味品及茶叶用ELISA方法检测,检测限大约为125ng/kg,ppt)
柱吸附能力: 大约100ng黄曲霉毒素B1
回收率: 约90% (用RIDASCREEN Aflatoxin B1试剂盒产品编号:R1201)
- 用途
RIDA 黄曲霉毒素免疫亲和柱适合于和酶免疫分析试剂盒(RIDASCREEN AflatoxinB1 及M1)或HPLC结合使用定量测定黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2 和M1。
用免疫亲和柱制备样品简化了样品提取过程并提高了样品的纯度。纯化了的样品可以用不同的分析方法测定。
- 测定原理
基本原理是抗原抗体反应。
柱子中含有连接单克隆抗体的凝胶悬浮物,抗体对黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2 和M1是特异的。
- 当样品通过柱子时,如果样品中有黄曲霉毒素存在,会结合到单克隆抗体上。
- 所有其它物质不会保留在柱子内。
- 用甲醇洗脱,黄曲霉毒素会从抗原抗体结合物中释放出来,甲醇引起抗体变性,所以抗原(黄曲霉毒素)是游离的并被洗脱出来。
- 提供的试剂
每个盒子中有10 或50 支免疫亲和柱子,样品可以分别处理。
- 需要的材料但盒中不提供
4.1 设备
----天平
----粉碎机
----离心机
----振荡器
----磁力搅拌器
----50ul 和100ul微量移液器
4.2 试剂
----甲醇
----吐温20
----二氯甲烷
----正庚烷
5.操作者应该注意之事项
----黄曲霉毒素是致癌物质应特别小心,避免样品及提取物接触皮肤(戴手套)。
----使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素提取物最好用pH7的高氯酸溶液(10%V/V)浸泡过夜
----不要使用过了有效日期的试剂盒。
6.储存条件
----RIDA 黄曲霉毒素免疫亲和柱保存于2-8
0C.
不要冷冻
----将不用的亲和柱放进原锡箔袋中重新密封并保存于2-8
0C
7.样品制备
样品应当存放在凉爽的地方避免光线照射。
黄曲霉毒素对光线敏感,因此样品及提取物应当避光存放。
按下面的提取过程,样品通过柱子的实际体积等于1g 原物质,取决于分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。
7.1 谷物,饲料及花生
----5g粉碎的样品与25ml甲醇70%溶液混合,
----用磁力搅拌器搅拌或振荡10分钟,
----用滤纸过滤,
----加15ml蒸流水到5ml滤液中混合,
----全部样品溶液过柱,
7.2 草药,调味品及茶叶
----5g粉碎的样品与25ml甲醇70%溶液混合,
----用磁力搅拌器搅拌或振荡10分钟,
----用滤纸过滤,
----加15ml蒸流水到5ml滤液中混合,
----加0. 25ml吐温20并搅拌2分钟,
----全部样品溶液过柱,
7.3 牛奶样
-----10
oC离心10分钟3500 g, 去除脂肪(如果没有冷冻离心机,请预先冷却到10
oC)
----离心后完全吸除上层的奶油层,
----10ml脱脂牛奶过柱。
7.4 奶粉
----10g奶粉放入容量瓶中加入蒸馏水至100ml,
----搅拌5分钟溶解,
-----10
oC离心10分钟3500 g, 去除脂肪(如果没有冷冻离心机,请预先冷却到10
oC)
----离心后完全吸除上层的奶油层,
----10ml脱脂牛奶过柱。
8 用RIDA 黄曲霉毒素免疫亲和柱提取
8.1测定之前注意事项
8.1.1使用之前将所有试剂回升至室温.(20-24
oC)
8.1.2将不用的亲和柱放进原锡箔袋中重新密封并保存于2-8
0C
注意:
8.2 过柱纯化样品
不要让柱子干燥!
8.2.1用2ml 蒸馏水平衡柱子(冲洗)
8.2.2将约1ml步骤7所得到的提取液加入柱子中
8.2.3在柱子顶端接上合适的接口并且用注射器作为储样容器连接在接口上,
8.2.4将其余部分的步骤7所得到的提取液加入注射器中,
8.2.5样品提取液以约1滴/ 秒的流速通过柱子,样品提取液必须缓慢地连续地通过柱子(用注射器加以正压或用真空泵施加负压,实验室可以购买样品处理装置),
8.2.6丢弃滤过的液体,
8.2.7用10 ml 蒸馏水冲洗柱子,
8.2.8丢弃滤过的液体,
8.2.9向柱子中吹少量空气或给以轻微的负压10秒钟,确认从柱子中除去残留液体,
8.2.10除去注射器并在柱子下面放置清洁可密闭的瓶子,
8.2.11用0. 5ml 甲醇(100%)洗涤柱子,甲醇必须缓慢地通过柱子(约1滴/ 秒),确保完全洗脱黄曲霉毒素,
8.2.12如果洗脱液流速太快(快于10秒),收集洗脱液再一次过柱,( 如谷物,花生,草药,调味品及茶叶等)
8.2.13向柱子中吹空气完全通过或给以负压约30秒,
9. 检测及定量
9.1 用RIDASCREEN Aflatoxin B1; Aflatoxin Total 试剂盒检测
----用样品稀释缓冲液以1:10 稀释洗脱液(1份洗脱液+9份稀释缓冲液既50ul +450ul),取50ul稀释液进行分析
请注意
为了获得样品中的黄曲霉毒素B1的实际浓度(ng/kg),从标准曲线上读出的浓度值必须乘以相对应的稀释系数. 当样品处理过程是按指示进行的,稀释系数为5, 测量范围从0.125ppb--2ppb。
如果黄曲霉毒素污染较严重,需要进一步稀释样品,洗脱液必须被稀释到最终含有10%甲醇,用(9ml样品稀释缓冲液+1ml甲醇100%)稀释缓冲液进一步稀释样品,详见RIDASCREEN Aflatoxin B1试剂盒说明书
为了改变检测下限提高灵敏度,可以增加通过柱子的样品液体积。
9.2 用RIDASCREEN Aflatoxin M1试剂盒检测
如将黄曲霉毒素亲和柱与RIDASCREEN Aflatoxin M1试剂盒结合使用,需要另外的缓冲液用于样品及Aflatoxin M1标准液的稀释,随试剂盒没有提供此试剂,但可以按下列方法配置。
样品稀释缓冲液 pH 7.2
(0.55g NaH
2PO
4 X H
2O; 2.85g Na
2HPO
4 X 2H
2O +9g NaCL , 加蒸馏或去离子水至1000ml)
用此缓冲液代替RIDASCREEN Aflatoxin M1试剂盒中的缓冲液1 对标准及样品进行稀释
用Aflatoxin M1标准浓缩液(10ng/ml)制备标准应用液
- 0标准15ml(13.5ml缓冲液1+1.5ml甲醇100%=标准液1
- 50ul(10ng/ml) + 6.2ml 0 标准=1:125=80ppt=标准6
- 1ml(80ppt/ml) + 1.0ml 0 标准=1:2 =40ppt=标准5
- 1ml(40ppt/ml) + 1.0ml 0 标准=1:2 =20ppt=标准4
- 1ml(20ppt/ml) + 1.0ml 0 标准=1:2 =10ppt=标准3
- 1ml(10ppt/ml) + 1.0ml 0 标准=1:2 = 5ppt=标准2
----用样品稀释缓冲液以1:10 稀释洗脱液(1份洗脱液+9份稀释缓冲液既50ul +450ul),取100ul稀释液进行分析
请注意
为了获得样品中的黄曲霉毒素M1的实际浓度(ng/kg),从标准曲线上读出的浓度值必须乘以相对应的稀释系数. 当样品处理过程是按指示进行的,稀释系数为0.5(10ml样品提取液), 测量范围从2.5 (ppt)—40ng/kg(ppt)
如果黄曲霉毒素M1污染较严重,需要进一步稀释样品,洗脱液必须被稀释到最终含有10%甲醇,用(9ml样品稀释缓冲液+1ml甲醇100%)稀释缓冲液进一步稀释样品,详见RIDASCREEN Aflatoxin M1试剂盒说明书
为了改变检测下限提高灵敏度,可以增加通过柱子的样品液体积。
注意样品及样品提取液保存
- 原始样品应当总是保存在冰箱中,注意要干燥,避光和密封好.
- 甲醇洗脱液应当避光保存在凉爽的地方.冷冻条件下可保存2-3月.
- 在碳酸氢钠缓冲液中的样品提取物(见9.1., 洗脱液蒸发后)在2-8C只能保存2-3天.