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Ni Sepharose 6 Fast Flow
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上海晶抗生物工程有限公司
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文献和实验三乙酸 nitrilotriacetic acid (NTA) 或亚氨乙酸 iminodiacetic acid (IDA). 这些螯合的基团会固定所需要的二价金属离子 (比如镍,铜,钴和锌),从而这些金属离子最后负责结合和分离混合液蛋白中的目标分子。在选择使用哪个配基上,你需要考虑 IMAC 树脂的结合能力主要取决于被纯化蛋白的性质和在纯化过程中所使用的金属离子。 注意:需要更加深入完整的了解如何选择最好的螯合试剂来达到我的目的,请参考我们之前发的一篇文章,- -「对于 NTA 和 IDA 配基你需要知道
罗氏蛋白亲和纯化树脂:cOmplete His-Tag Purificatio
的高结合效能与结合特异性是一步法纯化蛋白的必备条件。 毒性废物排出显著降低 镍脱落量极少,大大减少了毒性废物量,并避免了镍离子重新螯合填料的麻烦。 减少镍脱落 与氨基三乙酸(NTA )树脂或亚氨基二乙酸(IDA )螯合树脂不同,cOmplete His-Tag Purification Resin 是通过一种特殊的化学技术,使用一种强效螯合剂将镍离子固定化获得
对照。故障排除1.低产量或无转化体:原因可能是感受态大肠杆菌细胞的转化效率非常低,因此在转化前用空载体DNA检查转化效率。用于转化的过量的连接混合物或用于连接的过量的连接酶也可能导致该问题。在转化之前,确保DNA片段不含有污染物(例如,过量的盐,EDTA,蛋白质,苯酚等),并在结扎前适当地用正确的限制酶消化。2.没有插入的空载体:这可能是由载体再循环或不完全载体切割引起的,试图使载体去磷酸化并检查琼脂糖凝胶上的切割效率可能有助于您解决这个问题。3.插入序列错误:PCR引物中的错误和PCR中使用的低保
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