单组分TMB显色液(膜印迹,HRP显色用)

HRP显色

2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到最佳结果。 注意：荧光在一段时间后会越来越弱。 2.DAB显色 DAB（3,3二氨基联苯胺）和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂，对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化染色应用特别理想。 对于AP标记的二抗我们选用BCIP

Western 实验步骤

方法也不同，常用的检测系统有化学发光检测（ECL）和化学显色 DAB 检测系统。 化学发光检测（ECL）： 利用 HRP 催化化学发光物质，生成一种不稳定的中间物质，其衰变时在暗室内形成明显的肉眼可见的化学发光带，利用 X 胶片感光 原理，将结果记录下来。 ECL 显色试剂配制：化学发光底物 A 和 B 按照 1：1 比例等体积混匀。 将混合好的显色底物覆盖印迹膜 1-5 min，黑暗条件下观察荧光效果。 在暗室可用放射自显影胶片或化学发光成像系统记录结果 。 如采用放射自显影胶片，曝光几秒

【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法

。 8. 按第6 步方法再次清洗膜。 9. 准备底物工作缓冲液，混合等体积的鲁米诺/增强剂和稳定的过氧化物溶液。制备足够体积确保印迹点完全湿润，保证印迹点在孵育过程中不会干。推荐体积：0.1 ml/cm2印迹面。 10. 将膜在超感应显色底物工作液中孵育5 分钟； 11. 将膜从底物上移除，放到塑料布或其它防护膜上； 12. 将印迹贴到胶片上，在蛋白旁边曝光。任何标准的或者增强的放射自显影胶片都可以用。推荐第一次曝光30-60 s，为得到最佳结果，曝光时间可不同。另外，也可用CCD 相机或其它成像设施