氧化型辅酶I

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定

GSH和GSSG 参照 Anderson等 （1992）。取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ， pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20， 40 mmol•L-1 NaH2PO4•H2

琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定

倍，故测定时应避免溶血。如不能及时测定，血清应及早和血块分离，避免红细胞中乳酸脱氢酶逸入血清中。乳酸脱氢酶测定的方法很多，根据酶作用的反应可分为二大类：一类利用顺向反应以乳酸为基质；另一类利用逆向反应，以丙酮酸为基质。根据测定方法不同又可分为紫外分光光度法和可见分光光度法。紫外分光光度法需用紫外分光光度计测定反应中辅酶I量的变化。可见分光光度法利用2，4—二硝基苯肼和丙酮酸作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕色。目前较多使用以乳酸为基质的方法，此法所需的氧化型辅酶I较稳定，不似以丙酮酸为基质

乳酸脱氢酶释放试验测定NK细胞活性

乳酸脱氢酶释放试验测定NK细胞活性   【基本原理】     乳酸脱氢酶（LDH）是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中.释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I（NAD+ ）变成还原型辅酶I（NADH2 ），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮唑蓝（INT）或硝基氯化四氮唑蓝（NBT）形成有色的甲  类化合物，在490nm