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- 2026年01月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
35
- 细胞类型：
原代细胞
- 物种来源：
人/大鼠/小鼠/其他
- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/淋巴
- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
5ml-500ml
细胞类型：原代细胞
人大隐静脉内皮细胞以下实验方案介绍了贴壁培养哺乳动物细胞传代的一般流程。请注意昆虫细胞与哺乳动物细胞传代的一些关键步骤有所不同。
1）装有贴壁细胞的培养容器
2）经过组织培养处理的培养瓶、培养板或培养皿
3）完全生长培养基，预热至 37°C
4）一次性无菌 15-mL 试管
5）37°C 培养箱，充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气
6）平衡盐溶液，例如：杜尔贝科盐缓冲液 (DPBS)，不含、镁和红
7）解离剂，例如：胰蛋白酶或 TrypLE™ Express，不含红
8）用于活细胞和总细胞计数的试剂和设备，例如：Countess® 自动细胞计数仪、台盼蓝染料和血球计数器，或者 Coulter Counter® (Beckman Coulter)
人大隐静脉内皮细胞贴壁细胞传代的第一步是通过酶或机械方法将细胞从培养容器表面解离下来。
贴壁细胞传代流程
所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内工作。
1 .从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃。
2 .用不含和镁的平衡盐溶液冲洗细胞 (每 10 cm 2 培养表面积需要2 mL溶液)。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次。
注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、和镁。
3 .从培养容器中吸出冲洗液并丢弃。
4 .向培养瓶中加入预热的解离剂 (例如：胰蛋白酶或 TrypLE™)；试剂量应足以覆盖细胞层(每 10 cm 2 大约 0 .5 mL)。轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层。
5 .将培养容器在室温下孵育约 2 分钟。请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异。
6 .在显微镜下观察细胞解离情况。如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每30 秒钟检查一次解离情况。也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离。
7 .细胞解离程度大于等于 90% 时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽。加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基。吹打细胞层表面数次，使培养基分散。
8 .将细胞转移到 15-mL 锥形管中，以 200 × g 的离心力离心 5 至 10 分钟。请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异。
9 . 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，取出少量样品进行计数。
10 .采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess® 自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。必要时，可再次向细胞中加入生长培养基，以便达到所需的细胞浓度，并重新进行细胞计数。
注：我们建议使用 Countess® 自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。Countess®自动细胞计数仪计数所需的样本量与您目前使用的血球计数器所需量相同，且不到一分钟即可完成一个样本的典型细胞计数，适用于各种真核细胞。有关传统血球计数器使用的更多信息，请参阅第 41 页的"支持技术方案"部分。
11 .将细胞悬液稀释到该细胞系推荐的接种密度，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱。
注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖。
悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。
人大隐静脉内皮细胞悬浮培养容器
悬浮培养可采用未经组织培养处理的无菌培养瓶 (例如：不带折流板的摇瓶) 进行；但是，专为悬浮细胞培养设计的转瓶 (即：搅拌瓶)具有出色的气体交换功能，可进行较大规模的细胞培养。
转瓶有两种基本设计；其培养基由悬挂的搅拌棒或者垂直的叶轮搅拌 (即搅动)。垂直叶轮的换气效果更佳。转瓶总培养体积不能超过转瓶标示体积的一半，以便换气充分(例如：500 mL 转瓶中培养液体不能超过 250 mL)。
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文献和实验。静脉有深、浅静脉之分。深、浅静脉互相连通。深静脉常与同名动脉伴行。如肾动脉、肾静脉；股动脉、股静脉等。浅静脉位于皮下，常是注射、输液或抽血的常用静脉，如上肢皮下的肘正中静脉、头静脉，下肢皮下的大隐静脉，颈部皮下的颈外静脉以及头皮静脉等。静脉内有瓣膜，有防止血液倒流的作用。尤其下肢静脉，易受重力影响，静脉瓣最多；胸腹腔内的大静脉，如门静脉、肝静脉、上、下腔静脉则没有静脉瓣，由于心脏的舒张和吸气时的胸腔内压下降，腹内压升高等，可促进上述静脉血回流入心脏。 毛细血管毛细
冠状动脉心脏病就是冠状动脉狭窄或阻塞，导致心肌缺氧所造成的疾病。从发生的机转来看，不稳定心绞痛及心肌梗塞，这些冠状动脉急性病症都有一些类似的共同病理机转，也就是经由血管内皮细胞的受损，造成粥状斑块的溃疡或破裂，从而活化血液凝结的机能，迅速形成血栓。粥状斑块的破裂，通常会引发内皮细胞下层一些容易造成血栓的分子，大量释放于斑块附近，导致血小板的堆积、吸附及生长，进而形成富含血小板的血栓。经由这样的途径，许多的刺激因子便会造成更大量的血小板附着，而血栓可能会渐渐变大。随后凝血纤维蛋白渐渐形成
，而在冷冻的陈旧性红细胞膜上则降解为38kDa。HRF存在于正常人的红细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞及血小板上。HRF对反应性溶血作用的严格的种属限制性。如经抗HPF抗体处理的人红细胞对人C8、C9的反应性溶血作用敏感性增高，而对8种动物来源的C8、C9的反应性溶血作用则不敏感。体外试验表明，HRF能抑制C9与C8的结合及C9聚合，从而阻止MAC插入自身细胞的膜脂质双层及细胞溶解。HRF可能还与淋巴细胞杀（C9RP）介导的人大颗粒淋巴对羊红细胞和PNH患者红细胞的ADCC作用。 关于上述
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