EPI400 Electro

EPI400 Electro  

EPI400  Electroporation-Competent Cell

产品货号： JK-G87005                   

保存条件： -80℃   

产品规格 :
 

EPI400 Electro	5×50μl
	20×50μl

基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galUgalK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr)

简要说明

EPI400 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。-JKBio该菌株来源于 EC100菌株，将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。-JKBioEPI400 菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆，在加入诱导剂CopyCutterInduction Solution后又可以提高质粒产量到正常状态。

[mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标记的存在使 DH10B可用于蓝白斑筛选，tonA 赋予其抗噬菌体T1和 T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。-JKBio -JKBio -EPI400电击感受态细胞适用于不稳定DNA或毒性基因的克隆，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010 cfu/μg DNA。

注意事项

1. 加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6. 对于连接产物转化， 转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mMTrisHCl,pH7.5;1 mMEDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖0.6cm)避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。

8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

操作说明

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5分钟，待其沥干水分，正置 5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置 5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的EPI400电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； 

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量 TE缓冲液 (10mM TrisHCl, pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态

3. 用200 μl枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。

6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养过夜。