- ¥420 - 1600
- geltinsa
- JK-G8039-3
- 国内
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
23
- 英文名：
GV3101(pSoup) Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×50ul/50×50ul
| 规格： | 10×50ul | 产品价格： | ¥420.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×50ul | 产品价格： | ¥1600.0 |
GV3101(pSoup)电击感受态细胞
GV3101(pSoup) Electroporation-Competent Cell
产品货号： JK-G8039-3
保存条件： -80℃
产品规格 :
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-tetR)
简要说明
JKBio GV3101(pSoup)菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup即为GV3101(pSoup)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。JKBio 开发的GV3101(pSoup)电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pGs2-ZH(卡那霉素抗性)质粒(size:40 kd)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。1.的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan，若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低
操作说明
1. 的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。
2. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的JKBio农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5ug质粒DNA（质粒体积不大于6ul，用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此参数为JKBio推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/ml kan 时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需28℃培养60h；如果使用
备注
1、农杆菌相关抗生素配方：
2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
3、LB及YEB配方：
GV3101(pSoup) Electroporation-Competent Cell
产品货号： JK-G8039-3
保存条件： -80℃
产品规格 :
| GV3101(pSoup) | 10×50μl |
| 50×50μl |
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-tetR)
简要说明
JKBio GV3101(pSoup)菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup即为GV3101(pSoup)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。JKBio 开发的GV3101(pSoup)电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pGs2-ZH(卡那霉素抗性)质粒(size:40 kd)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。1.的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan，若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低
操作说明
1. 的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。
2. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的JKBio农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5ug质粒DNA（质粒体积不大于6ul，用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此参数为JKBio推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/ml kan 时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需28℃培养60h；如果使用
备注
1、农杆菌相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素（carb） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 硫酸卡那霉素（kan） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 链霉素（strep） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
| 利福平（rif） | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
| 庆大霉素（gent） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
| 农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
| AGL-1 | R | S | R | S | S |
| EHA101 | S | S | R | S | R |
| EHA105 | S | S | R | S | S |
| LBA4404 | S | R | R | S | S |
| GV3101 | S | S | R | R | S |
3、LB及YEB配方：
| component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
| Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
| Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
| NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
| Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
| Agar | － | 15 g |
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GV3101(pSoup)电击感受态细胞
¥420 - 1600
