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TRIzol LS Reagent
2年
北京百奥莱博科技有限公司
2-8℃
100ml
特别提示:包括液体样本TRIzol试剂在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
样本类型 | 样本量 | 产量 |
人全血 | 250μl | 3~10μg |
白细胞 | 1×106个 | 10~20μg |
细胞 | 1×106个 | 8~15μg |
肌肉/脑等组织 | 25mg | 10~25μg |
肝脏组织 | 25mg | 50~100μg |
液体样本: 全血、血清、病毒液 |
悬浮细胞、酵母 | 动植物组织 | 贴壁细胞 | |
1.样品预处理 | 粪便等固体样品,可用PBS 重悬样品,并匀浆后,3000rpm离心5分钟, 取上清作为病毒液样品。 其它样品直接使用即可。 | 如样本中细胞含量低,则需要采用离心法沉淀细胞后使用250μl 灭菌水重悬细胞再进行下面操作。 | 将样品转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。 | 每 10 cm2 生长的培养细胞中倒出培养液,用PBS 清洗一次,尽可能移除多余的溶液。 |
2.加入TRIzol-LS | 取250μl 液体样品加入到装有 750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。 | 向250μl液体样品中加入750μl TRIzol-LS。 | 将研磨好的组织加入到装有 750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。 | 加入750μl TRIzol-LS,使裂解液均匀分布于细胞表面,然后使用移液枪吹打细胞使其脱落并转移至 1.5ml EP管中。 |
3.裂解样品 | 加入TRIzol-LS 后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀,无块状物。室温静置5分钟,使核 酸蛋白复合物完全分离。 | |||
4.加水 | 液体样品不需要再额外加水。 | 加入250μl Rnase-Free H2O 混合均匀,静置 2分钟。 | ||
5.加*仿 | 加入200μl *仿,手腕用力振荡 15s,室温放置 2分钟。 | |||
6.离心分层 | 13000rpm离心10分钟,吸取600μl无色上清至新的1.5ml EP管中。 | |||
7.加异丙* | 向上述600μl上清液中加入600μl 异丙*,手腕用力上下颠倒数次,于-20℃放置 5分钟。 | |||
8.离心沉淀总RNA | 13000rpm离心10分钟,小心倒掉上清,留取底部总RNA沉淀。 | |||
9.漂洗总RNA | 向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇,上下颠倒数次,13000rpm离心5分钟,小心倒掉上清,留取底部RNA沉淀。 | |||
10.重复漂洗一次 | 重复步骤9再洗涤一次。 | |||
11.挥发残留乙醇 | 倒掉洗液,再次短离心10s 后,用10μl Tip 头吸干剩余的洗液,置于室温使乙醇挥发干净(~20分钟)。 | |||
12.溶解总RNA | 每管加入20~100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA |
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