- ¥1000 - 3600
- geltinsa
- JLC-G7210
- 国内
- 2026年05月29日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
82
- 英文名：
EPI300 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
12个月
- 供应商：
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件：
避光保存
- 规格：
5×50ul/20×50ul
| 规格： | 5×50ul | 产品价格： | ¥1000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 20×50ul | 产品价格： | ¥3600.0 |
EPI300 Electroporation-Competent Cell
产品货号： JLC-G7210
保存条件： -80℃
产品规格：5×50μl 20×50μl
产品介绍：
基因型 :
F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ –rpsL nupG trfA dhfr.
简单说明 :
EPI300电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂Ⅰ，ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳动物基因组DNA）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。此外，EPI300电击感受态细胞转化效率极高，特别适用于文库构建，生产的EPI300电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。
操作说明 :
1. 0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 2.取-80℃保存的EPI300电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。
3. 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
注意事项 :
1. 加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化， 转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mMTrisHCl,pH7.5;1 mMEDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖0.6cm)避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
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文献和实验一步实现单拷贝到高拷贝的转换－－Copy Control克隆技术（附图）
表达的条件下可以提供启动oriV所需要的trf A基因产物。另外phage T1-resistant TransforMax EPI300-T1R E.Coli也可提供这个基因的产物。 二、CopyControl克隆和克隆诱导步骤（图2）： 图1 图2 将目标DNA片断连接到已经线性化、去磷酸化的CopyControl pCC1 Vector上。 转化感受态细胞（TransforMax EPI300
一步实现单拷贝到高拷贝的转换---CopyControl克隆技术
1 CopyControl 克隆 和 克隆 诱导步骤（图2）： 将目标DNA片断连接到已经线性化、去磷酸化的CopyControl pCC1 Vector上。 转化感受态细胞（TransforMax EPI300 E.coli），涂皿，在氯霉素LB培养基上筛选。在这种条件下，trfA基因的表达被抑制， 克隆 以单拷贝数量生长。 挑选 克隆
【共享】CopyControl克隆技术：一步法实现单拷贝到高拷贝
E.coli.这是一个工程菌株，含有受诱导启动子严谨控制的trf A基因，在诱导表达的条件下可以提供启动oriV所需要的trf A基因产物。另外phage T1-resistant TransforMax EPI300-T1R E.Coli也可提供这个基因的产物。CopyControl克隆和克隆诱导步骤：将目标DNA片断连接到已经线性化、去磷酸化的CopyControl pCC1 Vector上。转化感受态细胞（TransforMax EPI300 E.coli），涂皿，在氯霉素LB培养基上筛选。在这种
