- ¥240 - 1020
- geltinsa
- JLC-G010
- 国内
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
16
- 英文名：
DB3.1 Chemically Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul/50×100ul
| 规格： | 10×100ul | 产品价格： | ¥240.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×100ul | 产品价格： | ¥1020.0 |
DB3.1 Chemically Competent Cell
产品货号： JLC-G010
保存条件： -80℃
产品规格 : 10×100μl 50×100μl
产品介绍：
基因型 :
F- gyrA462 endA1 glnV44 (sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK 2lacY1proA2rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl1
简单说明 :
DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有 gyrA462 基因，赋予其对ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体（例GATEWAYSystem vector) ，此菌株具有链霉素抗性。 High5TM系列DB3.1感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
操作说明 :
1. DB3.1感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL 室温 S.O.C. 培养基或LB培养基（推荐使用SOC培养基，可提高转化效率）。
4. 30℃，225 rpm复苏90分钟。 （当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19 计算转化效率，则需37℃， 225 rpm复苏60分钟。）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 培养基上。
6. 将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。（若转化control PUC19 计算转化效率，则需37℃培养过夜）
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入目的DNA时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT，其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl，在30℃下培养。3. 大约3 h，OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀，吸取
野生型 E.coli 并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源 DNA 。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源 DNA 的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对 DNA 的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外 DNA 重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（ natural transformation
