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- 百奥莱博
- HR0359-RPX
- 北京
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
382
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
提取液RT保存。抑制剂-20℃
- 规格：
50ml|100ml
特别提示：包括蛋白提取液(Western)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：蛋白提取液(Western)
产品货号：HR0359
产品规格：50ml|100ml
蛋白提取液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。蛋白提取液得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。蛋白提取液中已含常用磷酸酶抑制剂。
储存条件：提取液室温保存。抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。
注意事项：
1．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2．整个过程须保持样品处于低温状态。
使用方法：
A．细胞裂解
1．裂解液制备：每 1ml蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷 PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每 5×106个细胞中加入500μl冷的裂解液(每106个细胞加100μl蛋白提取液。
大约相当于6孔板的每孔加入100μl～150μl，或一个75 cm2培养瓶加1～2ml。裂解液和细胞应充分接触。如果蛋白提取液不足量，细胞裂解效率将会降低)，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B．组织裂解
1．裂解液制备：每1ml蛋白提取液加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3．将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4．将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
我公司销售的蛋白提取液(Western)北京品牌，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
keep-smile 最近在做原代培养的神经细胞的凋亡研究。对于六孔板中蛋白提取有些疑问。药物处理后，总有一些细胞漂浮起来，估计就是凋亡或坏死细胞，直接吸弃培养基怕对凋亡相关蛋白检测有影响。如果细胞消化离心，又担心提取不够迅速使一些目的蛋白去磷酸化，比如MAPK信号通路蛋白。请问大家，应该怎么解决这个问题呢，有什么好的办法？ ronaldo_zj 1. 我们也遇到过类似问题，但经过检测，我们发现培养基上清漂浮的细胞确实就是晚期
培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌
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