PAGE凝胶快速制备试剂盒（15%）P[可申请试用]

产品描述
 

蛋白电泳经常使用聚丙烯-酰胺凝胶（PAGE凝胶）来实现蛋白分离，此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成，前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用，后者则是根据凝胶所使用的丙烯-酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯-酰胺（甲叉丙烯-酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。

本试剂盒提供了一种快速制备PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶设备即可配胶，大大简化了制胶过程，此外，本品还具有以下特点：1）制胶速度快——最少仅需2 min即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释；2）彩色浓缩胶——浓缩胶呈彩色，为点样提供最大便利，所含颜色配方不影响电泳、染色及转膜等后续应用；3）无异味——无需使用TEMED，避免恶臭气味；4）稳定性高——试剂盒配套提供的硫酸铵催化剂溶液属改良型APS，其稳定性和催化效能都得到大大提升。5）新增功能——无需封闭分离胶，直接添加浓缩胶（熟读配胶步骤）。

本试剂盒所配制凝胶只能用于变性PAGE凝胶电泳，该规格可配制约125块mini胶（以0.75 mm厚度胶计算）。

产品组分
 

类别	组分编号	组分名称	产品编号/规格	保存方式
			20327ES62（125 gels）
Part Ⅰ	20327-A	15%-分离胶缓冲液	250 mL	4℃
	20327-B	15%-分离胶溶液	250 mL	4℃
	20327-C	15%-彩色浓缩胶缓冲液	80 mL	4℃
	20327-D	15%-浓缩胶溶液	80 mL	4℃
	20327-E	制胶杯	3个	4℃
Part Ⅱ	20327-F	改良型过硫-酸铵溶液	8 mL	-20℃

运输与保存方法
 

冰袋运输， 4℃保存。其中F组分改良型过硫-酸铵溶液如果长时间不用，需保存于-20℃，有效期12个月。

注意事项
 

1）建议电泳时电压在100-120V之间，如需要加快电泳速度，可增加至150V。

2）灌胶前，务必将凝胶溶液平衡到室温（如放置几分钟），可有效避免凝胶中气泡的形成。
3）过硫-酸铵溶液（改良型）的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验增加或减少。加入较多量的过硫-酸铵可加快凝胶速度，反之亦然。PAGE凝胶的凝聚速度与温度和过硫-酸铵的用量密切相关。

4）本产品已加入适量TEMED的替代品，如需进一步加快凝胶速度，临配胶前可按需补充适量TEMED。

5）胶的凝固与温度有显著的正相关性。同等条件下，温度越高，凝固速度越快。

6）彩色浓缩胶在储存过程中可能会产生少量沉淀，属正常现象，请放心使用。

7）改良型过硫-酸铵溶液保存于-20℃。为方便吸取使用，已开盖使用中的过硫-酸铵溶液可置于4℃保存。
8）本产品仅作科研用途！
 

 

使用方法

建议配胶时不要一次性配置太多块胶，避免来不及添加上层液（推荐最多2-3块）

1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度【参考附表1】

2 制胶流程（以一块0.75/ 1.0/ 1.5 mm的mini胶为例）

1）取等体积分离胶缓冲液和分离胶溶液混匀，即取两种溶液各2.0/ 2.7/ 4.0 mL。

2）往步骤1中的混合溶液中加入35/ 45/ 70 μL的改良型过硫-酸铵溶液（凝固太快可减半过硫-酸铵使用量），充分混匀。

3）将步骤2中的溶液注入制胶玻璃板中。注意加入分离胶后要在2 min内将浓缩胶注入凝胶模具内，且在灌注浓缩胶时要缓慢，防止浓缩胶与分离胶混合在一起。如果个人觉得配置困难，也可改编为自行用乙醇封闭之后再进行配置浓缩胶。

4）浓缩胶的配置：取等体积浓缩胶缓冲液和浓缩胶溶液混匀，即取两种溶液各0.5/ 0.75/ 1.0 mL，然后加入10/ 13/ 18 μL的改良型过硫-酸铵溶液，充分混匀。

5）注入制胶玻璃板中，插入梳齿（插胶梳时切勿用力过猛，轻轻插入）。

6）待15 min浓缩胶凝固后，拔去梳齿即可用于电泳。注：请尽量使用新鲜配置的电泳缓冲液。

 

附表1. 不同浓度SDS-PAGE分离胶参考分离范围

SDS-PAGE分离胶浓度	分离范围（kDa）
6%凝胶	70-300
8%凝胶	30-200
10%凝胶	20-80
12.5%凝胶	15-60
15%凝胶	10-45

 

HB200923