明胶-琼脂糖凝胶4FF北京厂家

特别提示：包括明胶-琼脂糖凝胶4FF在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：明胶-琼脂糖凝胶4FF
英文名称：Gelatin Sepharose 4FF
产品货号：QN4060
产品规格：25ml

明胶-琼脂糖凝胶4FF是采用溴化qíng法将明胶耦合到琼脂糖凝胶4FF基质上的一种亲和层析填料。明胶是一种高分子糖蛋白，在多种细胞的表面和许多细胞外液（包括血浆）中都发现了明胶的存在，它可以特异性的结合纤维连接蛋白。明胶琼脂糖凝胶4FF是专为纯化或除去纤维连接蛋白的一种亲和层析填料。

技术参数：
基质：高度交联的4%琼脂糖凝胶
颗粒大小：45～165μm
平均颗粒大小：90μm
配基：牛明胶衍生物
配基密度：每ml填料约5mg明胶
连接化学基团：CNBr
最大流速：200cm/h
耐压：0.1MPa
pH稳定性：pH3.0～10.0
化学稳定性：所有常用的水相缓冲液
保存液体：20%乙醇
保存温度：4～8℃

使用方法：
1．准备凝胶
① 让凝胶和所有的试剂达到工作时的温度。
② 配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
③ 明胶琼脂糖凝胶4FF是保存在20%的乙醇溶液中，取适量凝胶，清洗掉20%的乙醇，抽干。用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
2．装柱
① 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
② 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
③ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
3．平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
4．上样
① 样品用平衡液配制，常用磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
② 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
5．洗脱明胶-琼脂糖凝胶4FF可以采用不同的方式洗脱纤维连接蛋白：
① 使用含有溴盐的缓冲液，例如溴化钠或溴化钾，并在低于平衡缓冲液pH值的条件下洗脱。一种推荐的洗脱缓冲液是：0.05M的醋酸钠，pH值5.0，含1M的溴化钠或溴化钾。
② 可以在平衡缓冲液中加入8 M的脲，来洗脱吸附在凝胶上的纤维连接蛋白。
③纤维连接蛋白还可以通过在平衡缓冲液中添加精氨酸来进行洗脱。
6．再生根据样品的性质，明胶琼脂糖凝胶4FF可以再生，以达到重复使用的目的。可以采用2～3柱体积的高pH值（0.1M的Tris-HCl，0.5M NaCl，pH值8.5）的缓冲液和低pH值（0.1M NaAC，0.5 M NaCl，pH值 4.5）的缓冲液交替清洗凝胶。一个周期重复3次，然后用3-5倍柱体积的平衡缓冲液平衡，即可进行下次试验。如果在纯化过程中使用了洗涤剂或变性剂（如8 M尿素），那么这些洗涤剂也可以用于洗脱缓冲液中。2.7清洗在一些应用中，像变性的蛋白质或脂类这样的样品，在再生过程没有被洗脱下来，可以通过加入一些洗涤剂，例如：0.1％的Triton X-100，在37℃的条件下洗一会。立即用至少5倍柱体积的结合缓冲重新平衡。2.8储存明胶-琼脂糖凝胶4FF应储存在4～8℃，20%的乙醇溶液中。特别注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

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