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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20摄氏度
- 保质期:
3个月
- 英文名:
pMD-19T-CD79a
- 库存:
100
- 供应商:
LSMBIO
- 规格:
2ug
pMD-19T-CD79a Plasmid
Catalog No. PVTB00061
Vector Backbone pMD19-T
Backbone manufacturer TaKaRa
Vector type Cloning Vector
Backbone size w/o insert 2692bp
Cloning site 5 None
Site destroyed during cloning None
Cloning site 3 None
Bacterial resistance Ampicillin
Growth strain DH5alpha
Growth temperature 37 Centigrade
High or low copy High Copy
Selectable markers None
Background Full length cDNA clone of Homo sapiens CD79a molecule
Gene Information
Alternative Gene Name IGA; MB-1
Insert Gene name CD79a
Insert size 681bp
Accessions NM_001783.3
Tag None
Species Homo sapiens (human)
Gene ID 973
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文献和实验按照TaKaRa的说明书,我用了Cool Start法,就是所有操作和试剂都是放在冰上进行的,据说能够减少非特异性。我当时担心目的基因量不够,所以P了两管,分到四个孔跑胶回收的。胶回收用的是OMEGA的试剂盒。 切胶回收之后测得目的片段浓度大概为20 ng/ul。按照TaKaRa的pMD18T说明书的要求,pMD18T需要加入1 ul,而目的片段需要0.1 pmol-0.3 pmol,换算一下,需要的目的片段的量大概为0.1*1800*325=58500 pg=58.5 ng到0.3*1800
或者进入 google,点击」图片搜索」,直接查找图谱。 5. 寒梅砺剑阁(热心生物人整理的) http://yoou.bokee.com/5757561.html 6. 其他的一些核酸数据库 方法三:一些重要试剂公司网页 这些网站除了得到质粒图谱等信息,还可以得到关于质粒使用方面的信息,现在很多质粒,特别是应用比较广泛的质粒都一些公司商业化的质粒,基本是由一个质粒你就会联想到一个公司的名字。 比如简单的,克隆载体 pMD18-T
18/19T然后再切下来,因为可以保存引物位点(当然引物不能含酶切位点),切得是MCS提供的位点;再后来想了一个更好的办法是用M13-47和RMV引物括了再切(这两个引物在MCS以外),片断浓度大,不需提质粒,没有RNA干扰。注意不是pMD simple而是pMD,前者是没有酶切位点的。 4:连接:这是最痛心的事情,前一阵一个月没连上一个,最近两天连了三个。自己认为片断浓度问题倒是好说,但是必须保证片断的纯度。那一个月迷信TAKARA片断回收试剂盒,方便,但是里面的醇和RNA并没有除净;切胶回收就连上
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