丙烯葡聚糖凝胶系列填料是烯丙基葡聚糖和 C7H10N2O2的交联共聚物,
平均粒径为 50μm,同时增加了基体的刚性,确保快速流动特性和高分辨率。
1 理化指标
产品名称 分离范围(球蛋白)
平均粒径 pH 适用范围
耐压
化学稳定性
S-100 HR
1 × 103-1 × 105
50um
3-11(长时间)
2-13(短时间)
0.15 MPa
一般常用缓冲
液,浓度低于
0.15M 的弱酸碱
S-200 HR
5 × 103-2.5 × 105
S-300 HR
1 × 104-1.5 × 106
S-400 HR
2 × 104-8 × 106
S-500 HR
4 × 104-2 × 107
*检测条件: 层析柱 16mm×600mm *柱床高 60cm,25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl。
2 贮存
产品应密封贮存在 4℃~25℃(保存溶液为 20%乙醇)通风、干燥、清洁的地方,不能
冷冻。用过的柱子贮存在 4℃(20%乙醇),保质期:2 年。
3 操作步骤
3.1 装柱
(1)让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液,对所有的缓冲液进
行脱气处理。
(2)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干
净和完整。
(3)根据需要量取相应量的凝胶,用去离子水清洗掉 20%乙醇。
(4)将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出
液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定(注意压
力不要超过填料最大耐压)。
3.2 平衡
上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积,直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的 pH
值和电导值等于上柱 Buffer 的 pH 值和电导值)。3.3 上样
(1)样品用平衡液配制,样品一定要离心或过滤后上样(0.45um 滤膜),如果样品盐
浓度太大,则需要处理后再上样。
(2)推荐的上样量不超过柱体积的 5%。
3.4 洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
3.5 再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质体物质在
再生过程中洗脱不掉。出现下面这些情况,是必须需要清洗再生的:
(1)背压增加;
(2)色谱柱顶部的颜色变化;
(3)分辨率降低;
(4)转换接头和凝胶表面之间出现空隙。
如果观察到压力增大,在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否
被污染,然后通过用 0.1M NaOH 洗涤柱子,除去沉淀的蛋白质,非特异性结合的蛋白质和
脂蛋白。
4 注意事项
(1)上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,
影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。
(2)在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱
会使流速变慢。
(3)不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。