B0001 20X Bolt™MOPS SDS运行缓冲液

核酸电泳工作流程——5 大主要步骤

2. 次优样品分离。(A) 负载影响条带分辨率。 (B) 上样量过低会导致条带扭曲。 在上样缓冲液中准备好样品和分子量标准，其最终的体积通常占胶孔体积的 30%。由于孔底分布不均匀(图 2B)，使用较少的上样体积会导致条带扭曲。对于含有 DNA 结合蛋白或粘性末端的样品，凝胶上样之前，混合物需加入至 含有 SDS 的上样染料中一同加热，因为蛋白质结合以及 DNA 片段之间的相互作用会导致分离效果不佳。 c .上样染料和缓冲液选择 制备凝胶电泳时，样品中添加了凝胶上样缓冲液 (通常是 6X 或 10

专家点评：双向电泳中常犯的六大错误

C左右，然后加入碘乙酰胺。通常我们在100 μl样品中加入10 μl 20%(w/v)的碘乙酰胺水溶液，并在室温下孵育30分钟。 通过这一步，我们可以获得更为锐利的条带，并排除了一些假象，如两条带、其他的高分子量条带、点样孔中的沉淀，以及凝胶上的线。 4. SDS电泳中运行缓冲液的滴定 到目前为止，大部分单向和双向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用是在基于Lämmli的不连续缓冲液系统中开展的[1]。其他基于磷酸盐、咪唑或其他缓冲液的均一系统表现

蛋白分离的不连续缓冲系统的比较

： a)氯（-），由胶缓冲液提供，充当快速移动的先导离子。b)MES或MOPS（-），（取决于电泳缓冲液的选择）充当后随离子。MES: 2-(N-morpholino)ethane sulfonic acidMOPS: 3-(N-morpholino)propane sulfonic acidc)Bis-Tris碱（+）充当出现在胶中的共同离子，Tris（+）由电泳缓冲液提供。合并低pH值的胶缓冲液（pH6.4）和电泳缓冲液（pH7.3-7.7）导致了电泳时显著降低的工作pH值。图2 NuPAGE®