Invitroge Platinum SYBR Green

逆转录、qPCR 实验还出错？这几点你可能没注意！

%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好

如何选择qPCR预混液

液为预先优化好的混合物，通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言，对于多个指标，包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型，目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出，但很难是全部。如何选择最适合的那一个，小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然，就多重分析而言，探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过，SYBR Green的优势

qPCR常见问题及其分析

PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束