- ￥100 - 150
- 自有品牌
- E025-TG1
- 上海
- 2026年03月31日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
半年
- 供应商：
上海武竟科技
- 保存条件：
-80冷冻
- 规格：
25uL
转化效率可达4×1010 cfu/μg pUC19以上
保存条件：
收到货后请立刻放入-80℃冰箱的下层，6个月保质期。请勿保存于液氮中。保存温度的微小变动都会导致感受态效价的大幅降低。
使用方法：
- 电转感受态 (25 μL/支)
- pUC19质粒（10 pg/μL）
- 连接产物（自制）
- 0.1cm 电转杯（BTX，45-0124）
- 电转仪（Biorad，165-2662）
- 14mL圆底摇菌管（BD，352059）
- 氨苄抗性的9cm直径LB平板
- SOC液体培养基
- 将摇床设定为37℃，250rpm，开启预热备用；
- 1个含有975μL SOC、1个含有990μL SOC、2个含有900μL SOC的 14mL无菌圆底摇菌管，放入开启的摇床中预热；
- 将电转杯插入冰中预冷；
- 将电转仪调至1800V电压，600Ω电阻，10μF电容（如果电转在冷房里进行更好）；
- 将电转感受态细菌插入冰中放置3~5分钟解冻后，
- 转化pUC19质粒检测感受态细菌转化效率：
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- 转化小量连接产物
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- 转化大量连接产物
- 取出37℃预热的装有975μL SOC培养基的摇菌管放在超净台试管架上；
- 取出预冷的电转杯在超净台上放平并擦去表面水分，将菌液-DNA混合液沿壁转入电转杯中（最好不要产生气泡，如果产生气泡则要在超净台上轻磕一下电转杯去除气泡，否则会产生电火花），放入电转仪中电击，电击后10秒内加入975μL预热的SOC培养基（时间恒定值最好在3.5-4.5ms之间）；
- 立刻用移液枪将1mL细菌悬液全部吸出转入14mL无菌圆底摇菌管中，37℃，250rpm培养1小时
- 吸出10μL细菌液加入到990μL 预热的SOC培养基中混匀；取100μL稀释液加入到900μL 预热的SOC培养基中混匀；再取100μL稀释液加入到900μL 预热的SOC培养基中混匀；则菌液梯度稀释了100，1000，10000倍，再从低浓度到高浓度分别取100μL涂布在氨苄抗性的9cm直径LB平板上，37℃倒置培养过夜后，统计菌落数
电转感受态细胞的转化效率计算说明：
假如1000倍稀释且涂布了100μL稀释液的平板上长出了40个克隆，则计算方法如下：
40/(10pg/1000) x (1mL/100 μL) = 4x104cfu/pg =4 x1010cfu/μg
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文献和实验1从微量培养基平皿中挑取单个菌落，接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨，10g Bactoyeast,5g NaCl，加水至1 000ml)中，37℃振荡培养过夜。 2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中，37℃振荡培养至OD=05~07，约25~3h。 3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
，对感受态效率提高有帮助，第一次多加一点缓冲液，我经常加至20ml，效果不错。 关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多，最复杂的莫过于电转化，而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转化。对于做克隆工作的人而言，高而稳定的感受态可减轻不少麻烦。 现在大肠杆菌转化效率最高的要数电转化，可达到1010，但是操作起来比较麻烦。要想又简单，又能有较高的转化效率，最好的莫过于1990年《gene》上刊登的由Inoue H.等提出的高效感受态的制备与转化方法。 根据实
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