5ml,血清移液管

细胞培养注意事项（入门级）

一般保存于－20℃，一般解冻是放在4℃冰箱解冻，耗时长，而且必须解决完全之后，才能进行完全培养基的配制。所以要提前几个小时就将血清从－20℃转入4℃，以期完全解冻。当然如果这一次就需要用完的话（是指用这些血清配制的培养液都用完），也可以放到37℃解冻。第四，最重要的是保证过程中无菌。液体必须要分装。无论过程中用到的培养液、胰酶、血清、PBS、生理盐水、抗生素尽量分装。分装是为了防止污染。如果操作有误，仅能威胁到其中一支，而非整个。培养液、血清、PBS、生理盐水分装为20mL、50mL或100mL

垂直电泳槽的使用

，以确保胶条插入位置准确。合拢灌胶模具后并直立放置，双手均匀用力向下扣住翼型扳手以关闭灌胶模具。若位置正确，校准卡应该可以正常上下抽拉活动而不被夹在胶条与玻璃板之间。（图3- 5） •用5 ml分离胶溶液（图 6）制备浓度为12％的SDS-PAGE凝胶，然后用移液管将1 ml乙醇滴入装好的灌胶模具中。等候60分钟使凝胶聚合。当把溶液倒入玻璃板夹层之间时，将移液管嘴直接置于玻璃板之间，缓慢地滴出液体，尽量避免形成气泡。凝胶完成聚合后，移除乙醇，将制备好的浓缩胶溶液倒入到分离胶上。轻轻将0.75 mm

在无血清细胞培养条件下将人 iPS 细胞体外分化为结肠类器官

玻片中，用P-200移液管去除残留的1X PBS (D8537)。避免通过未剪去尖端的P-200移液管吸入类器官。 用0.5 mL Blocking Buffer（5%马血清+ 0.5% Triton X-100，溶于1X PBS中）在4℃留置一夜或室温下留置2-4小时，渗透固定类器官。注：推荐使用与二抗宿主同物种的血清。 用P-200移液管从含类器官的载玻片上移除Blocking Buffer。避免P-200移液管头吸入类器官。 在Blocking Buffer中制备一抗(300-500 µL