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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
35
- 英文名:
Marteilia refringensPCR
- 保质期:
1年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温避光保存
- 规格:
50T/100T
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥3600.0 |
产品名称:折光马尔太虫PCR检测试剂盒
英文名称:Marteilia refringensPCR
特点优势:
1.特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对种属及血清型的特异检测,特异性均达到。
2.重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为。
3.灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4.实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5.优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良的保守性和特异性。
6.优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集。
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次)。
3、运输:折光马尔太虫PCR检测试剂盒采用泡沫箱加冰密封进行运输。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书。阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
折光马尔太虫PCR检测试剂盒组成及试剂配制:
1、 酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
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文献和实验核细胞。用DMEM培养液悬浮,进行台盼兰排斥实验鉴定活力,细胞计数,调整细胞数总量约为1×107个,抽提核结合蛋白或总RNA。上述过程均在4℃条件下进行。 核蛋白提取方法(该方法可才用active motif 公司提供的核蛋白提取试剂盒进行,深圳晶美公司有售,注意细胞数量要达到10的7次方,低温、蛋白酶抑制、蛋白定量等) 取细胞悬液1ml(细胞数总量约为1×107个)高速(10,000~12,000g)离心5min,吸弃上清,用Buffer A [HEPES 10mM (在4C时pH7.9 )、氯
,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA; 6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA; 7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟; 8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味. 注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。 PCR纯化试剂盒操作流程: 1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。 2.向200μl二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB,混匀。 3.加入spin
因子协同作用后,虫体细胞变性,结果虫体对碱性美蓝不易着色。 材料和 试剂 以弓形虫速殖子为抗原;采用正常人血清为致活因子。碱性美蓝溶液,取美蓝10g加入95%酒精100ml,制成饱和酒精溶液,过滤后取3ml加pH11,要求临用时新鲜配制。待检血清经56℃30分钟灭活,冰箱保存备用。 方法将待检血清用生理盐水倍比稀释,每孔0.1ml,加上述稀释的弓形虫速殖子0.1ml,置37℃水浴1小时,加碱性美蓝溶液0.02ml/孔,37℃水浴










