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文献和实验精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙: 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小
-PAGE过程恒压的方式,通常把电压设置在100V,然后设定定时时间为90-120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。 通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳,或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况,预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。 3. 转膜(Transfer): (1)膜的选择:推荐在Western实验中选用PVDF膜。 硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用,但硝酸纤维素膜比较水浴加热3-5分钟,以充脆,在操作过程中特别是用镊子夹取
的必要条件之一。 总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙: 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合
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