乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA产品详情

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA预期用途
乙酰胆碱受体抗体检测试剂盒用于定量测定人血清中乙酰胆碱受体抗体（AChR Ab）浓度。乙酰胆碱受体（AChR）的自身抗体是重症肌无力神经肌肉接头衰竭的原因，这是一种神经肌肉疾病，导致肌肉无力和易疲劳。 这些抗体的测量在疾病诊断和管理中具有相当大的价值。

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA检测原理
测定系统取决于人血清中AChR Ab与AChR上类似位点结合的能力，如各种单克隆抗体，如MAb1（包被在ELISA板孔上）和/或MAb2和/或MAb3（用生物素标记）。 在不存在AChR Abs的情况下，在板孔上包被的MAb1，AChR和MAb2与MAb3生物素之间形成复合物。 然后通过添加链霉抗生物素蛋白过氧化物酶（SA-POD），底物（TMB）和终止溶液来检测结合的MAb2和MAb3生物素。 在AChR Abs存在下，MAb1-AChR-MAb2 / MAb3生物素复合物的形成受到抑制，导致结合的SA-POD较少，450nm处的最终吸光度降低。 测试血清中AChR Abs浓度越高，MAb生物素结合的抑制越大。

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA组成成分

乙酰胆碱受体抗体AChR检测试剂盒ELISA检测步骤
1.将100μl阴性对照（CI），校准物（1-4），阳性对照（CII，CIII）和测试血清移入单独的1.5ml Eppendorf管中，并做好相应标记。
2.将25μl胎儿和成人型AChR混合物（K + L）移入每个Eppendorf管（来自步骤1）并密封管。确保所有液体都在每个管的底部（如果有疑问，将离心管在微量离心机中以10-15,000g离心10秒钟）。轻轻涡旋并在2-8℃下孵育过夜（16-20小时）。
3.使用涡旋混合器轻轻混合来自步骤2的每个样品-AChR混合物管。根据测定方案，将50μl每种样品-AChR混合物移液到相应的孔（A）中，复孔测定。
4.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育60分钟，同时以> 500rpm振摇。
5.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。
6.向每个孔中加入50μl重构的MAb-生物素溶液（由H和J制备）。
7.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育60分钟，同时以> 500rpm振摇。
8.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。
9.向每个孔中加入100μl重构的SA-POD（由D和G制备）。
10.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育30分钟，同时以> 500rpm振摇。
11.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。手工洗板情况下，额外多一个洗涤步骤，即在最后一次洗板时，用纯净水洗板一出去任何的泡沫。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。
12.向每个孔中加入100μl底物溶液（E）并立即摇动。
13.在室温下黑暗中孵育30分钟。
14.向每个孔中加入50μl终止溶液（F）。摇动板5秒钟。
15.在添加终止溶液后30分钟内读取450nm处的光密度，以620或690nm作为参考波长。


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