血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒

特别提示：包括血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
英文名称：Blood nuclear DNA and mitochondrial DNA extraction kit
产品规格：25次

本试剂盒是在本公司血液DNA提取试剂盒产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。

产品特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2. DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50μg/mL 新鲜血液，线粒体DNA产率约为1μg/mL 新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5. 所用试剂安全无毒，健康环保。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白细胞核和线粒体的分离
1. 将3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。注意：最好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA 得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2. 向血液中加入等体积(3mL)的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分最好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000 g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清(含线粒体)到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mL D型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000 g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清(含线粒体)到第4 步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。
将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 将汇集的含线粒体的上清于4℃下15000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mL D型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9. 用1mL D型红细胞裂解液洗涤线粒体2次(每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀)。
10. 所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用)
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75μL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12. 再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清(含DNA)转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14. 加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000 g离心5分钟，去尽上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16. 重复上步一次。
17. 短暂离心，去尽残留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暂晾干半分钟，加入适量DNA 洗脱液2.0 溶解DNA(对细胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50μL DNA 洗脱液2.0)。
19. 65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD 检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。