- ￥210 - 860
- 普利莱
- 北京
- C1050-100/500
- 2025年12月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃
- 保质期：
一年
- 英文名：
Nondenaturing Lysis Buffer
- 库存：
大量
- 供应商：
普利莱
- 规格：
100ml/500ml
| 规格： | 100ml | 产品价格： | ￥210.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500ml | 产品价格： | ￥860.0 |
描述：非变性细胞裂解液(Nondenaturing Lysis Buffer, C1050)内含非离子型去垢剂和盐，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合能力或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，在这种情况下，应该使用非变性细胞裂解液制备总蛋白。
储存：4℃保存 12个月有效
操作步骤：
制备细胞裂解产物：
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
- 每50～100 ml PCV加入5倍体积非变性组织细胞裂解液（250~500 ml）,涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
- 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物，
制备组织裂解产物：
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
- 加入 0.5-1 ml 预冷的非变性组织细胞裂解液；
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
- 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物，可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。
注意：
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
- 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择进行添加。
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文献和实验- Hu B, Hao S, Miao Y, et al. Inhibiting PP2A Upregulates B7-H3 Expression and Potentially Increases the Sensitivity of Malignant Meningiomas to Immunotherapy by Proteomics[J]. Pathology and Oncology Research, 2022: 112.
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- Shen Y, Li M, Xiong Y, et al. Proteomics analysis identified ASNS as a novel biomarker for predicting recurrence of skull base chordoma[J]. Frontiers in oncology, 2021, 11: 698497
- Zhang Y, Shen Y, Li M, et al. Loss of INI1 inhibits the expression of SIDT1 and promotes tumor progression in skull base chordoma by regulating EZH2-mediated H3K27me3[J]. 2022."
,分别可用于在变性和非变性条件下的细胞裂解产物的制备.其中,非变性裂解液(C1050)含有非离子化去污剂,盐和蛋白磷酸化酶抑制剂.它可以在非变性条件下裂解细胞并释放绝大多数细胞浆和膜蛋白,因此适用于针对内源性蛋白位点的抗体的免疫沉淀.如果抗原为不可溶性(如细胞骨架,chromatin,membrane rafts 等),或者内源性蛋白的活性位点存在于蛋白折叠结构中,则可以用变性裂解液(C1052)来提取细胞裂解产物,而且,由于体外翻译的蛋白常常趋向于形成聚合物,所以应在变性条件下进行细胞裂解产物的制备
裂解液将1 μg 相应的抗体和10~50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜； 3. 免疫沉淀反应后，在4°C 以3 000 g 速度离心5 min，将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用1 ml 裂解缓冲液洗3~4次；最后加入15 μl 的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10分钟； 4. SDS-PAGE，Western blotting或进行质谱分析。 一、 样品
到 5 ml 的 1X PBS 中。4 °C 缓慢搅拌 2 小时。离心沉淀微球，用 PBS 清洗两次。将微球重悬在 1 倍体积的 PBS 中。（处理后的微球可以在 4 °C 存放 2 周）4. 3X SDS 上样缓冲液：187.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 25 °C), 6% w/v SDS, 30% 甘油, 150 mM DTT, 0.03% w/v 溴酚蓝。细胞裂解样品制备1. 吸去培养基。加入含调控因子的新鲜培养基，处理所需的时间。2. 在非变性条件下收集细胞，弃去培养
