细胞质pH值荧光探针(BCECF,AM)(117464-70

特别提示：包括细胞质pH值荧光探针(BCECF,AM)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞质pH值荧光探针(BCECF,AM)
英文名称：BCECF Acetoxymethyl ester
产品货号：KM0169
产品规格：1mg

CECF,AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性，进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF，一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定，排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现，通过确定pH依赖性的发射光强度比率（Ex=535nm），分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发，使用荧光分光光度法或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞，也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF,AM还被广泛用于各种功能实验，如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF,AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

主要参数：
CAS NO：117464-70-7
分子式：C42H40O21
分子量：880.7
纯度：≥95%（HPLC）
外观：黄色薄膜
溶解性：溶于yǐ腈，DMSO，DMF
保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。

使用方法

一、储存液制备
实验前将低温保存的BCECF,AM置于室温回温至少20min。用高质量的无水DMSO溶解粉末，使其充分溶解，配制成1-10mM储存液。按照单次用量分装后置于≤-20℃避光干燥保存，六个月稳定。
注意：用水溶性缓冲液或培养基稀释储存液到需要浓度的工作液，现配现用，不可保存。正常的BCECF,AM溶液无色且无荧光（浅色和弱荧光可接受）。

二、BCECF,AM的加载（哺乳动物细胞）
大多数哺乳动物细胞不需透化，直接用稀释的细胞膜渗透BCECF,AM探针孵育即可加载。一旦进入细胞，非特异酯酶水解非荧光AM前体，产生荧光且pH灵敏的探针。阳离子探针BCECF的低泄露率和小的细胞内体积使得探针在胞内的终浓度明显高于胞外孵育浓度。总体而言，与钙离子探针比如Fura-2相比，以AM形式加载的BCECF更少出现胞内区域化。大量的实验数据表明BCECF在细胞质内是自由流动和解离的。以下步骤仅作为参考，具体可根据实际情况调整。
1．制备活细胞悬浮液（~10⁶个细胞/ml）。
  注意：贴壁细胞的加载条件基本类似于制备悬液的细胞。培养皿内的贴壁细胞可用生理盐稀释的BCECF AM探针浸没。对于生长在盖玻片上的细胞，轻轻洗掉维持培养基后，只需将盖玻片转入一含有BCECF AM染色液的培养皿内即可。
2．将适量1mM BCECF,AM储存液用生理盐缓冲液如HBSS稀释100~500倍。通常情况，使用能够获得足够荧光信号的最低浓度BCECF AM来加载（也许低至0.1μM的加载浓度足够），这样可以降低AM水解的副产物生成，且有利于更充分的水解。加载培养基必须无氨基酸或缓冲液不含伯胺或仲胺，因其有可能切割AM阻止加载。血清的存在，有可能含内源性酯酶活性，也需避免使用，直至探针已经完全加载好。
3．取等体积的BCECF AM稀释液到制备好的细胞悬液中。于4℃-37℃孵育15-60min。
  注意：某些研究者报道生理温度比室温孵育产生更高程度的区域化。
4．用新鲜培养基清洗细胞两次。

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