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文献和实验%FBS终止的,然后差速1h,然后还是用10%FBS的HG-dmem养的,没有用brdu,心肌细胞还是比较多和稳定的,我第3天就可以用,第2天晚上看就会有搏动。七、血清和培养基的种类及品牌问题。 1、问:细胞培养的胎牛血清用哪个公司的产品比较好呢?周围有人用PAA或Hyclone的,这两种跟Gibco或sigma出品的差别大吗? 答:如果是长得非常快得细胞如pa317,293,c6等恶性肿瘤细胞,一般得国产血清就可以,如果是原代培养的细胞,最好应用胎牛血清或类标准胎牛血清,Hyclone公司血清
了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4) 勿将血清置于37℃
瓶。你的培养基最好换换,可以多查文献啊,一般是高糖的DMEM+5%FBS+10%马血清(我的经验是Gibco的马血清贴壁最好);马血清的功能是抑制PC12细胞形态的变化,有利于贴壁生长,不会抑制你用NGF诱导的PC12分化的;胎牛血清的作用是与细胞的增殖有关。PC12换液不要太勤!3到4天换液都行,并且最好保留一部分(如三分之一)旧培养基,有利于细胞的贴壁与增殖!!你传代时用胰酶消化吗??有人说用0.025%的胰酶消化30秒就足够了,你可以试试,我没有用胰酶也行,为了让细胞不起团,我用了0.02%
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