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文献和实验ml双蒸水中加1mlDEPC,放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。配75%乙醇的DEPC水的配制:100ml盐水瓶内装40ml双蒸水,加40ulDEPC,37℃过夜,送至高压。 (2) 75%乙醇(要在抽提时现配):用无水乙醇和DEPC水配制(DEPC水:无水乙醇=1:3),然后放于-20℃备用。 (3) 异丙醇:放入棕色瓶 (4) 氯仿:放入棕色瓶 (5) Trizol:100ml/瓶 存放于4℃ 二, 抽提时注意事项: 全程佩戴一次性手套和口罩,手套要勤换,避免戴
吸收,且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大,因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。 测定时,将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中,用配制蛋白质溶液的溶剂(水或缓冲液)作空白对照,在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值a280。蛋白质浓度可控制在0.1~1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿,盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时,a280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。 许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值(a1%1cm)有文献数据
分钟,以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤)。稀释至1升,过滤,滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定,酚酞作指示剂,然后适当稀释,约加水1倍,使最终的酸浓度为1N左右。 (3)标准蛋白质溶液: 精确称取结晶牛血清清蛋白或 —球蛋白,溶于蒸馏水,浓度为250 g/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊,可改用0.9 % NaCl溶液。 2. 器材 (1)可见光分光光度计 (2)旋涡混合器 (3)秒表 (4)试管16支 (三)操作
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