FITC标记鬼笔环肽(20μM贮存液)报价

特别提示：包括FITC标记鬼笔环肽(20μM贮存液)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：FITC标记鬼笔环肽(20μM贮存液)
英文名称：FITC-Phalloidin
产品货号：KM0180
产品规格：300T

本制品为FITC荧光标记的鬼笔环肽，以溶于甲chún的20μM储存液形式提供，具体的工作浓度请参考文献或自身实验体系来调整，常用浓度范围80-200nM。按照100nM的工作浓度来算，可进行300次细胞染色。

产品应用：
1．对固定的组织切片和组织细胞培养物进行肌动蛋白丝（F-actin）的荧光染色；
2．体外制备稳定的荧光肌动蛋白丝（F-actin）。

保存：-20℃避光保存，1年有效。

注意事项：
1．本品具有一定的毒性，LD50=2mg/kg，操作时请注意防护。
2．本品（Cat#KM0180）以溶于甲chún的储存液（20μM）形式提供，300T包装，适合用量少的研究者；另提供冻干粉形式（Cat#KM0133），1mg包装，相对更经济，适合用量多的研究者；
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程（免疫荧光染色）：
有几种方法都能用来染色组织细胞培养物内的肌动蛋白丝（F-actin）染色，其中，固定步骤在获得可信且具代表性的细胞F-actin分布情况中至关重要。固定步骤基于实验自身需求来选择。多聚甲quán或wù二醛都能得到优秀的F-actin染色和良好的板状伪足维持保存。

一、实验材料准备
1.1 FITC Phalloidin（Cat# KM0180）
1.2 1×PBS Buffer（pH 7.4）,for Cell Culture（Cat#SH30256.01）
1.3固定液（溶于PBS的4%多聚甲quán，pH 7.0）（Cat# KM0181）
1.4破膜液（溶于PBS的0.5%Triton X-100）
1.5抗荧光淬灭剂（Cat# KM0182或Cat# KM0183）
1.6即用型DAPI染色液（Cat# KM0160）
1.8（可选）BSA,Standard Grade（Cat# KM0184）
1.9盖玻片密封液（透明指甲油）

二、染色工作液准备
2.1刚收到或第一次使用时，将充分融化的本品（20μM储存液）根据单次使用量进行分装，置于-20℃避光保存，一年稳定。
2.2正式实验前，使用1×PBS Buffer（pH 7.4）稀释储存液到需要的工作浓度，常用的工作浓度范围为80-200nM。可以100nM为起始工作浓度，最佳的工作浓度请参考文献或根据实验室现有体系来摸索。
  注①：可使用含1%BSA的PBS Buffer稀释储存液，能够降低非特异背景染色，也能最小化鬼笔环肽粘附到管壁的可能性。
  注②：染色工作液现配现用，室温避光保存。

三、染色流程
3.1细胞爬片培养，使其密度至少达半汇合。
3.2吸掉培养液，用37℃预热的1×PBS Buffer（pH 7.4）清洗细胞2次。
3.3用溶于PBS的4%多聚甲quán固定细胞，室温固定10min。
  注意：固定过程中甲chún能破坏肌动蛋白，因此，固定液中最好避免接触任何甲chún。较好的固定液是无甲chún的甲醛。
3.4用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次，室温下30s/次。
3.5用破膜缓冲液透化细胞，室温处理5min。
3.6用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次，室温下30s/次。
3.7取200μl现配的FITC-Phallodin染色工作液，完全覆盖盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min。
  注意：通常情况4℃-37℃都适合用于染色。为了避免工作液的挥发，孵育过程中将盖玻片置于一密封的容器内。
3.8用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次，室温下30s/次。
  可选：完成步骤3.8后，直接将盖玻片倒置在含DAPI的抗荧光淬灭剂（如DAPI Fluoromount-GTM，Cat# KM0183）的载玻片上。然后吸掉多余淬灭剂并用指甲油密封盖玻片四周。
3.9取200μl DAPI溶液（100nM）或商业化的即用型DAPI染色液对细胞核复染，室温约30s。
3.10用1×PBS Buffer清洗细胞1-2次，室温下30s/次。
3.11将盖玻片倒置在滴有一滴抗荧光淬灭剂（如Fluoromount-GTM，Cat# KM0182）的载玻片上。用纸巾轻轻吸掉多余淬灭剂，然后用透明指甲油密封盖玻片四周。将此法处理玻片置于4℃避光存放至少6个月仍能维持F-actin染色。
3.12荧光显微镜下观察染色结果，选择FITC激发/发射滤片（Ex/Em=492/518nm）和DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。

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