实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)

特别提示：包括实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)
英文名称：BaReSYBR Mixture
产品货号：WE0140
产品规格：5ml

  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系， 浓度为2×， 包含HotStar Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测。本品中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。经独特方法处理的热启动DNA聚合酶和专门的PCR缓冲液使本品具有特异性高的特点，满足常规荧光定量检测。该产品应用范围广，适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。

产品组成：

组份	5ml
2×BaReSYBR Mixture	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaReSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2、PCR反应程序：
两步法PCR：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶需在预变性95℃、5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

除了实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ),，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN90302	25mM氯化镁溶液(PCR级MgCl2溶液)	5mL
BTN131212	PCR Mix染料	10mL
WE0116	2×富含GC PCR MasterMix	1ml
ALH610	长片段DNA快速高保真PCR MasterMix(含红色示踪染料)	1ml|5ml
ALH264	荧光定量用第一链反转录预混合液	20μl×50次
ALH199	20×Sybr Green I(荧光定量PCR级)	20μl×100次|20μl×1000次
RFT102	Taq DNA聚合酶	500U(100μl)|5×500U(5×100μl)|2000U(400μl)|5×2000 U(5×400μl)
SY0041	脱氧腺苷三磷酸溶液(100 mM)(dATP)	400ul
SY0056	NTP套装(100 mM each)	4×1mL
SY0057	高保真DNA聚合酶	100U
SY0293	逆转录酶	5000U
JN0004	第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)	50次|100次
JN0020	Phi29 DNA聚合酶	125U
JN0054	PCR增强剂I	0.5ml×5
GL1301	PCR扩增缓冲液(10×,pH8.3)	10ml