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- 百奥莱博
- WE0140-UIM
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
456
- 英文名：
BaReSYBR Mixture
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
5ml
特别提示：包括实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)
英文名称：BaReSYBR Mixture
产品货号：WE0140
产品规格：5ml
本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系， 浓度为2×， 包含HotStar Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测。本品中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。经独特方法处理的热启动DNA聚合酶和专门的PCR缓冲液使本品具有特异性高的特点，满足常规荧光定量检测。该产品应用范围广，适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。
产品组成：
| 组份 | 5ml |
| 2×BaReSYBR Mixture | 5×1ml |
| ddH2O | 5×1ml |
注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系：
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaReSYBR Mixture | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2、PCR反应程序：
两步法PCR：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | |
| 变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
| 60℃ | 1 min | ||
| 95℃ | 15 s | ||
| 60℃ | 15 s |
注意：
1)本产品所采用的热启动酶需在预变性95℃、5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
储存条件：-20℃，避免反复冻融
除了实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ),，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN90302 | 25mM氯化镁溶液(PCR级MgCl2溶液) | 5mL |
| BTN131212 | PCR Mix染料 | 10mL |
| WE0116 | 2×富含GC PCR MasterMix | 1ml |
| ALH610 | 长片段DNA快速高保真PCR MasterMix(含红色示踪染料) | 1ml|5ml |
| ALH264 | 荧光定量用第一链反转录预混合液 | 20μl×50次 |
| ALH199 | 20×Sybr Green I(荧光定量PCR级) | 20μl×100次|20μl×1000次 |
| RFT102 | Taq DNA聚合酶 | 500U(100μl)|5×500U(5×100μl)|2000U(400μl)|5×2000 U(5×400μl) |
| SY0041 | 脱氧腺苷三磷酸溶液(100 mM)(dATP) | 400ul |
| SY0056 | NTP套装(100 mM each) | 4×1mL |
| SY0057 | 高保真DNA聚合酶 | 100U |
| SY0293 | 逆转录酶 | 5000U |
| JN0004 | 第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂) | 50次|100次 |
| JN0020 | Phi29 DNA聚合酶 | 125U |
| JN0054 | PCR增强剂I | 0.5ml×5 |
| GL1301 | PCR扩增缓冲液(10×,pH8.3) | 10ml |
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文献和实验PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法利用了SYBR Green荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法成熟的miRNA大小只有22nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。（1）颈环法原理图（2）加尾法原理图由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接进行反转录、PCR
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实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
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