辛基-琼脂糖凝胶CL-4B北京厂家

特别提示：包括辛基-琼脂糖凝胶CL-4B在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：辛基-琼脂糖凝胶CL-4B
英文名称：Octyl-Sepharose CL-4B
产品货号：QN4071
产品规格：25ml

辛基-琼脂糖凝胶CL-4B是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物，含有疏水性正辛基。具有较好的流速，在配基和骨架间的键很稳定，可反复在pH7.0、120℃热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白，因其经去污剂处理后仍有强疏水性。

技术参数：
基质：4%琼脂糖凝胶
配基：正丁wán基n-Octyl
配基密度：40μmol/mL
颗粒大小：45～165μm
最大流速：50cm/h
每毫升结合量：15～20mgHSA
操作温度：室温
保存条件：4～28℃

使用方法：
1.装柱
①nbsp;将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
②nbsp;根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。
③nbsp;将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④nbsp;用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤nbsp;打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：0.02～0.05mol/L的PBS加1～2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上样
①nbsp;样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；
②nbsp;一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③nbsp;介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强，介质对组分吸附越牢。
4.洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如：0.02～0.05mol/L的PBS。
5.再生
一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6.在位清洗
①nbsp;对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
②nbsp;对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质，可用1M NaOH去除。
③nbsp;对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异bǐng醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
7.去热源
用0.5M的氢氧huà钠清洗柱子5～6小时或者用0.1M的氢氧huà钠24小时。或用以下步骤去除：
①nbsp;2倍柱体积的70%的乙醇；
②nbsp;2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5
③nbsp;1倍柱体积4M尿素
④nbsp;3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
8.消毒
用0.5～1.0M NaOH室温下洗8～10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项
①nbsp;密封贮存于4～28℃（保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠），通风、干燥的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存于4℃（20%乙醇）。
②nbsp;在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

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