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说明书为准
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ESTRADIOL 6-BSA, MS X 6E1-500UL
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文献和实验珠子对照样品外每个样品中加入一抗,抗体的量按照以往经验来加,1-10ug的抗体/25ugDNA效果较好。3加入20ul的proteinA/G珠子(预先用超声处理成为单链的鲱精DNA和BSA吸附,详见步骤4.3a)到所有样品总,4°C摇转IP过夜。3a将蛋白A/G珠子与单链鲱精DNA进行预处理。如果同时使用蛋白A珠子和蛋白G珠子,等体积混合这两种珠子使用RIPA溶液洗3次。除去RIPA溶液,加入单链鲱精DNA到珠子终浓度为75ng/μl,再用BSA将珠子终浓度定到0.1μg/μl。加入两倍珠子
In Situ Hybridization Using Digoxigenin Labeled Probes
and SpeedVac dry for 2 min 7) Resuspend pellet in 75 ul hybridization buffer. Hybridization Buffer 0.6 M NaCl 50 mM Sodium phosphate buffer, pH 6.8 1X Denhardt's (0.02% BSA / 0.02% Ficoll / 0.02% polyvinylpyrrolidone) 5 mM MgCl2 Hybridization
0ul 其次,将以上浓度的标准溶液依次加入96孔板中,每孔加40ul,制作平行孔。之后,将样品上清液用1×PBS稀释50倍(或100倍),混匀,以每孔40ul加入上述96孔板中,制作平行孔。 根据不同浓度BSA在595 nm的不同的紫外光吸光值,用酶标仪测定样品在595 nm处的吸光值,用excel求出一元线性回归方程(y=kx+b),其中y是吸光值,x是测定的样品上清液的浓度,求出
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