高通量96孔板质粒提取试剂盒（磁珠法)现货供应

特别提示：包括高通量96孔板质粒提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高通量96孔板质粒提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：96wells Magnetic Plasmid Extraction Kit
产品货号：WH0151
产品规格：2×96孔

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从1-1.5ml菌液中分离纯化2-20μg高质量质粒DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对质粒DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的质粒DNA，能够达到快速分离纯化质粒DNA的目的，可zuì大限度去除蛋白及其他杂质，从而保证提取质粒的纯度。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如酶切、测序、文库筛选、连接和转化等。

产品特点：
·快捷简便：整个过程无需多次离心，可在1h内完成96个样品提取。
·得率高：独特包埋的磁珠可特异高效的吸附质粒。
·纯度高：可直接用于下游实验，如酶切、测序等。
 

组分	规格
RNase A（10mg/ml)	600μl
溶液P1	60ml
溶液P2	60ml
溶液P3	80ml
漂洗液PW	50ml
磁珠悬浮液G	3×1ml
半裙边96孔过滤板	2块
96孔深孔板	4块
洗脱缓冲液EB	30ml
封口膜	10张

储存条件：室温（15–25℃）干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2–8℃。在2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。溶液P1在加入RNase A后，应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。单独包装的RNase A可在室温保存12个月。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．溶液P1使用前先加入RNaseA （加入比例为溶液P1:RNaseA = 100:1），混匀，置于2–8℃保存。
2．第一次使用前请按照瓶上标签在漂洗液PW中加入相应体积的无水乙醇。
3．使用前先检查溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。溶液P2和P3使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为室温下进行离心。
5．提取的质粒量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关。
6．磁珠悬浮液使用前需充分混匀。

操作步骤：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．集菌步骤：向一个新的96孔深孔板中添加1.0-1.5ml摇好的菌液（或者取摇好菌液的96孔板），加盖封口膜，3600rpm离心10min收集菌体，倒掉培养基，倒扣于吸水纸上除去残留的培养基（如果菌液浓度较低，可以重复集菌一次）。
2．向收集好的细菌培养物中加入250μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA)，加盖新的封口膜，使用漩涡混合器彻底悬浮菌体。
3．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入250μl溶液P2，加盖新的封口膜，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，瞬时离心使封口膜上的水珠落回板中。
  注意：温柔混匀以防有基因组DNA污染。混匀后菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。
4．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入350 μl溶液P3，加盖新的封口膜，立即温和地上下翻转6-8次使其充分混匀，3600rpm离心10min。
  注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
5．将96孔过滤板和一个新的96孔深孔板叠放在一起，转移步骤4中的上清到对应的96孔过滤板中，3600rpm离心5 min。
6．向上述96孔深孔板中的每孔加入15 μl磁珠悬浮液G，抽打混匀。
7．将深孔板室温静置5 min，期间抽打混匀一次。
8．将深孔板于磁力架上静置30 sec，待磁珠完全吸附时倒掉液体。
9．将深孔板从磁力架上取下，每孔加入600 μl漂洗液PW （请先检查是否已加入无水乙醇)，抽打混匀。
10．将深孔板于磁力架上静置30 sec，待磁珠完全吸附时倒掉液体。
11．重复步骤9、10，液体尽量去除干净。
12．深孔板于磁力架上，室温晾干5-10min。
  注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA。
13．将深孔板从磁力架上取下，加入50-100 μl洗脱液，涡旋混匀，室温静置5-10min，期间涡旋混匀一次。
14．将深孔板放置于磁力架上静置30 sec，待磁珠完全吸附时小心将DNA溶液转移并于适当条件保存。
  注意：洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

质粒DNA浓度及纯度检测：
1．得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

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