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- 上海羽朵
- YDBA053
- 2025年07月15日
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上海羽朵生物
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(YD053)人IgG定量ELISA试剂盒使用说明
原理和优点
本实验采用双抗体夹心法。用人IgG（Fab）单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IgG与包被抗体结合，接下来与加入的酶标抗人IgG（FC）单抗形成免疫复合物连接在板上，再加入TMB底物工作液显蓝色，最后加终止液，在450nm处测OD值（或在450nm和630nm处双波长检测OD值），IgG浓度与OD值成一定比例关系，可利用换算公式代入不同的标本在一定稀释度下的OD值求出其相应IgG浓度，相比市面上其它试剂盒来讲省去了绘制标准曲线图的麻烦，使结果更加科学精确。
试剂盒组成（2-8℃保存）
| 酶标板（含自封袋）（Coated Wells） | 96孔 | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
| 标本稀释液（Sample Buffer） | 50ml | 显色液A | 10 ml |
| 标准品（Standards）：1000ng/ml | 1 ml | 显色液B | 10ml |
| 酶标抗人IgG（FC）（Enzyme Conjugate） | 15ml | 终止液（Stop Solution） | 10ml |
| 封板膜 | 2张 | 说明书 | 1份 |
- 将试剂盒从冰箱取出恢复室温20分钟。
- 收集标本：血清等需要尽快检测，2-8℃保存不超过48小时；更长时间须-20 ℃保存，避免反复冻融。由于本试剂比较灵敏在检测前血清要用标本稀释液做10万倍稀释，其它特殊标本需要做实验摸一下最合适的稀释度，使OD值进入标准品对照范围即可。
- 标准品液配制：标准品原液为1000ng/ml的抗体溶液。试验前取小离心管各7管，每管加入标本稀释液200ul。在第一管中加入标准品原液200ul用加样器混匀后吸出200ul，移至第二管。如此反复做倍比稀释至第七管。
- 洗涤液：用蒸馏水做20倍稀释（例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）。
- 加样：将稀释好的标准品7管依次加入酶标板孔每孔100ul第8孔加标本稀释液做空白对照，浓度分别是500ng 250ng 125ng 62.5ng 31.8ng 15.8ng 7.9ng 0ng/ml， 稀释好的标本也是每孔100ul随后将酶标板贴封板膜置37℃ 温育60分钟。
- 洗板：吸出板孔中液体随后用洗涤液将反应板充分洗涤5次，在滤纸上或不掉纤维的布上印干。
- 每孔中加入相应的酶标记物工作液100ul。贴封板膜将酶标板置37℃温育60分钟。
- 洗板：同前。
- 每孔加入显色剂A和B各50 ul，换贴新封板膜置37 ℃避光温育20分钟，从加B开始计时。
- 每孔加入50ul终止液震荡器混匀。
- 用酶标仪在450nm处（或在450nm和630nm处双波长检测OD值）测吸光值。
- 在标准品OD值中找到测试标本OD值所在区间。以高浓度那个标准品为A，低浓度那个为B。
- 测试标本中IgG浓度 (ng/ml)=B浓度(ng)＋ （测试标本的OD值—B OD值）×（A浓度(ng)—B浓度(ng)）
3、 实际标本中IgG浓度(ng/ml)=测试标本浓度×稀释倍数
试剂盒性能
- 1. 灵敏度：IgG检测浓度小于5ng/ml。
- 特异性：可检测天然或重组的人IgG不与人其它细胞因子有交叉反应。
- 重复性：板内、板见变异系数均小于12％。
- 1. 标准品及待测样品均建议做复孔，每次测定严格来说都需要重新做标准品。
- 3. 严禁没有复温就打开板条因为这样会缩短有效期，板条开封后剩余板条和干燥剂要放自封袋再封好保持其干燥。
- 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存，不要冷冻。
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