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文献和实验10分钟。将会看到血液分为2层,上层是淡黄色的血浆,约占60%。2、用巴士滴管或吸管将上层血浆吸出,还剩约1ml血细胞层,在血细胞层中加入1:1体积,即约1ml的灭菌生理盐水,混匀,见图2。 图2 在血细胞中加入生理盐水充分混匀 3、以下是把12ml生理盐水与血细胞混合物(相当于12ml全血)合并成一管后分离白细胞过程。将24 mL淋巴细胞分离液(是全血体积的2倍)预先加入灭菌的50 mL 离心管中。将与生理盐水混合的血细胞缓慢加入淋巴细胞分离液液面上,注意尽量不要让血细胞层掺入到淋巴
,高压灭菌之后,再去内毒素。去内毒素方法很多,最简单可以放在烘箱180度3小时。或者过去内毒素的柱子后,高压灭菌。第二,各种溶液灭菌:抗生素用去内毒素水配制后,直接过滤除菌(过0.22u滤头)。可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。现在用的培养液,如果是商业化液体培养基,不用处理。如果是粉末,需要用去内毒素水在生物安全柜(或超净工作台)进行配制,再过滤除菌。可以先配浓缩液(如10×),过滤除菌后。再用灭菌去内毒素水稀释成1×培养液。第三,完全培养液的配制:培养液加上合适比例的血清即可。但血清
,使用时可向100ml培养液中加入1 ml谷氨酰胺溶液。 (九)肝素溶液的配制 含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高,肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠,包装为约为0.56克/瓶,配制时,可将其溶于100ml三蒸水中,定容,过夜,然后过滤除菌,分装小瓶,保存温度为℃。使用时,向100ml培养液中加入1ml(精确可加入0.9ml)即可。 (十)Ⅰ型胶原酶 0.1%Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意:因为Ⅰ
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