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文献和实验流式课堂 | 易被忽略的 CD4、CD8 共表达细胞——胸腺淋巴细胞
做过流式实验的同学,对 CD4、CD8 这两个指标都不会陌生。检测 CD4+ T 细胞和 CD8+ T 细胞分型,是流式中最常见的实验之一。 通常,我们会先检测 CD3,来圈总T淋巴细胞,再分别用 CD4 抗体和 CD8 抗体,来区分 CD4+ T 淋巴细胞(辅助或调节性T细胞)和 CD8+ T 淋巴细胞(细胞毒性 T 细胞)。 新生小鼠脾脏细胞 上图为新生小鼠脾脏细胞进行的 CD3-PE、CD4-FITC、CD8-APC 三色流式实验结果。从图中可以看出,在新生小鼠脾脏中,绝大
FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如,在实验设计时,选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗,相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy
流式抗体的选择和配色原则由于在流式细胞实验过程中,荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此,需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素,例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。本文介绍如何选择合适的流式抗体: 1、需要满足抗体选择的最基本条件:目标蛋白特异性,反应种属以及应用实验等。 靶标特异性:确定标记物名称,确定是细胞表面表达,还是细胞内表达。细胞内表达需要进行透膜。 物种来源:确定待测样本的种属来源。例如,抗小鼠的抗体,不能用于人的样本的检测
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