0.2mlPCR杂色薄壁管(八排) PCR-0208-A

PCR-SSCP技术

现配）、TEMED、甲酰胺上样缓冲液、固定液、银染液、显色液。2、微量加样器、PCR自动热循环仪、聚丙烯酰胺凝胶电泳装置。实验步骤一、PCR反应20 ml反应体系成分如下：模板DNA（100 ng/ml） 1 ml 10×PCR反应缓冲液 2 ml Taq DNA聚合酶（5 U/ml） 0.2 ml 4×dNTPs（2.5 mmol/L） 1 ml MTHFR上下游引物 各 1 ml ddH2O 加至终体积

PCR疑难解答

次数和/或模板DNA的用量。 泳道中出现模糊条带： 减少循环次数或模板DNA的用量。 提高退火温度，但不要超过68℃。 重新设计引物或设计更长的引物。 其他值得注意的条件： 建议使用0.2-ml薄壁管。厚壁管在92℃时不能有效地使模板变性。 最佳反应体积为50ml，推荐用30ml矿物油覆盖（对盖子加热的PCR仪可以不加）。 大多数反应中，0.75ml（0.5~1ml）的酶量在大多数情况下可以得到满意的结果。 建议使用1.75mmol/L

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MgCl2浓度；无MgCl2的缓冲液以0.5 mmol/L为梯度增加MgCl2浓度。泳道中出现模糊条带，如果DNA模板中存在RNA，则按上述提示浓度补加MgCl2，因为在PCR反应中可能缺少游离的Mg2+。检查退火温度和变性条件，如果有需要的话，可降低退火温度。检查模板和引物的用量。增加循环次数和/或模板DNA的用量。泳道中出现模糊条带：减少循环次数或模板DNA的用量。提高退火温度，但不要超过68℃。重新设计引物或设计更长的引物。其他值得注意的条件：建议使用0.2-ml薄壁管。厚壁管在92℃时不能有效