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上海研谨生物
96孔/盒
u | 孵育温度: | 25℃ |
u | 孵育时间: | 30min~15min |
u | 样本检测下限 |
鸡肉样本: | |
四环素 ··········································· | 0.4ppb |
二甲按胺四环素 ·································· | 0.4ppb |
吡四环素 ········································ | 0.4ppb |
金霉素 ········································ | 0.4ppb |
脱甲基金霉素 ································· | 1.2ppb |
土霉素 ·········································· | 0.8ppb |
强力霉素 ······································· | 1ppb |
猪肉、蜂蜜样本: | |
四环素 ·········································· | 0.5ppb |
二甲按胺四环素 ································· | 0.5ppb |
吡四环素 ······································ | 0.5ppb |
金霉素 ········································· | 0.5ppb |
脱甲基金霉素 ································ | 1.5ppb |
土霉素 ··········································· | 1ppb |
强力霉素 ········································ | 1.2ppb |
吡四环素 ······································· | 110% |
金霉素 ··········································· | 100% |
脱甲基金霉素 ··································· | 35% |
土霉素 ············································ | 58% |
强力霉素 ········································· | 45% |
1 | 微量测试孔 | 每条 8 孔,一板 12 条 | |
2 | 标准品浓缩液 | 1ml | 黑色帽 |
(81ppb) | |||
3 | 高浓度标准品 | 1ml | 黑色帽 |
(100ppb) | |||
4 | 酶标记物 | 7ml | 白色帽 |
5 | 抗体工作液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
7 | 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
8 | 终止液 | 7ml | 黄色帽 |
9 | 20X 浓缩洗涤液 | 15ml | 白色帽 |
10 | 10X 样本提取液 | 50ml*2 | 透明帽 |
11 | 标准品复溶液 | 15ml*2 | 蓝色帽 |
必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实 | 3、 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于 | |||||
验结果。 | 洗板的一致性,正确的洗板操作是 ELISA 测定 | |||||
u | 样本前处理需配制: | 程序中的要点。 | ||||
配液 1 | 样本提取液 A | 4、 所有恒温孵育过程,避免光线照射,用盖板膜 | ||||
用去离子水450ml 与50ml 10X 样本提取液 | 盖住微孔板。 | |||||
混匀或按 9:1 的比例按需配制(如 10X | u 操作步骤: | |||||
样本提取液有结晶,需溶解后在进行稀 | 1、从 2~8℃冷藏环境中取出所需试剂,室温(20~ | |||||
释)。 | 25℃)平衡 30min 以上,注意每种液体试剂使 | |||||
配液 2 | 样本提取液 B | 用前均须摇匀。 | ||||
取甲醇 50ml 与 450ml 样本提取液 A 混匀 | 2、配制标准品 | |||||
或按 1:9 的比例按需配制。 | 标准品 6:50µl 标准品浓缩液(81ppb)用 950µl | |||||
配液 3 | 样本提取液 C | 标准品复溶液稀释 | 4.05ppb | |||
取甲醇 100ml 与 270ml 样本提取液 A 混匀 | 标准品 5:600µl 标准品复溶液与 300µl 标准品 6 | |||||
或按 10:27 的比例按需配制。 | 混合 | 1.35ppb | ||||
u | 样本处理: | 标准品 4:600µl 标准品复溶液与 300µl 标准品 5 | ||||
(a)鸡肉处理方法 | 混合 | 0.45ppb | ||||
1、称取 1±0.05g 均质后的样本于 50ml 离心管中, | 标准品 3:600µl 标准品复溶液与 300µl 标准品 4 | |||||
加入 8ml 样本提取液 A(见配液 1),振荡 3min, | 混合 | 0.15ppb | ||||
室温 4000r/min 以上,离心 10min; | 标准品 2:600µl 标准品复溶液与 300µl 标准品 3 | |||||
2、取 50 上清液用于分析 | 混合 | 0.05ppb | ||||
样本稀释倍数: 8 倍 | 标准品 1:标准品复溶液 | 0ppb | ||||
(b)猪肉处理方法 | 3、取出框架及需要数量的微孔,将不用的微孔放 | |||||
1、称取 1±0.05g 均质后的样本于 50ml 离心管中, | 入自封袋,保存于 2-8℃。 | |||||
加入 10ml 样本提取液 B(见配液 2),振荡 3min, | 4、配液:将 15ml 浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去 | |||||
室温 4000r/min 以上,离心 10min; | 离子水按照 1:19 稀释(1 份浓缩洗涤液+19 份 | |||||
2、取 50 µl 上清液用于分析 | 去离子水),或按所需用量配制洗涤液。 | |||||
样本稀释倍数: 10 倍 | 5、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每 | |||||
(c)蜂蜜处理方法 | 个样本和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和 | |||||
1、 称取 1±0.05g 均质后的样本于 50ml 离心管中, | 样本孔所在的位置。 | |||||
加入10ml 样本提取液C(见配液3),振荡3min, | 6、加标准品/样本 50µl/孔到各自的微孔中,然后加 | |||||
室温 4000r/min 以上,离心 10min; | 加入酶标记物 50µl/孔再加入抗体工作液 50µl/ | |||||
2、 取 50 µl 上清液用于分析 | 孔,用盖板膜封板,轻轻振荡混匀。25℃环境 | |||||
样本稀释倍数: 10 倍 | 中反应 30min。 | |||||
7、将孔内液体甩干,用已稀释的洗涤液 250µl/孔 | ||||||
六、酶标免疫分析程序: | ||||||
洗板 4~5 次,每次间隔 15~30 秒,用吸水纸 | ||||||
u | 测定前应须知: | |||||
1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温 | 拍干(拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺 | |||||
(20~25℃)。 | 破)。 | |||||
8、显色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B | ||||||
2、 使用之后立即将所有试剂放回 2~8℃。 | ||||||
液 50µl/孔,轻轻振荡混匀,25℃环境中避光显色 15min。 | ||||||
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