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抗体细纯化试剂盒

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  • KC-01-1ML    
  • 2026年04月03日
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    抗体细纯化试剂盒说明书
    产品编号:KC-01-1ML           
    • 原理
    本试剂盒采用Protein A和protein G纯化法。Protein A/G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A/G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上,当抗血清从中流过时,特异性的IgG就与配基结合,其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同,需要具体选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3,兔,人,猪的多克隆抗体用protein A纯化,而小鼠单抗IgG1,大鼠单抗,小鼠,大鼠,山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。
    • 产品特点
    1. 试剂盒内含有分析所需的所有必需试剂,操作简单便捷;
    2. 试剂盒内组分经实验优化,确保更高的检测灵敏度;
    3. 保存条件:2-8
    4. 规格:待纯化抗体1-5ml
    三、所需材料
    仪器:离心管(1.5 mL、50mL)、0.45µm滤膜、注射器、气流控制器
    试剂:去离子水
    四、 试剂盒组成
    组成部分 装量
    A柱 1ml
    B液 50ml
    C液 5 mL
    D液 2 mL
    E液 10 mL
    F液 10 mL
     
    • 纯化步骤
    1. 样品准备:将抗血清与B液1:5混合,用0.45µm滤膜过滤(防止堵塞柱子)。
    2. 平衡柱子:用10mL去离子水洗去F液,再用5-10倍体积的B液过A柱。
    3. 上样:将准备好的血清样品上样,控制流速20s/滴。
    4. 洗脱杂蛋白:用B液洗柱子,直至结合液中不含蛋白。
    5. 收集抗体:用C液过柱,同时收集漏出液(约0.5-1m1/管), 直至漏出液中不含蛋白。
    6. 测定各收集管中的蛋白含量,合并蛋白管。(注意:收集管中需事先加入约10-200u1的D液,防止抗体在过酸的环境下失活)
    7. 柱子再生:用5-10倍体积的E液再生柱子。
    8. PBS 透析收集的抗体。
    • 注意事项
    1. 待纯化抗血清及试剂盒溶液根据体积大小需要回温1-3小时。
    2. 根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。
    3. 将所纯化的抗体加入10%-20%的甘油置于-20摄氏度或者-80摄氏度即可长期保存。



     

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