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北京百奥莱博科技有限公司
60次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
Bradford蛋白定量试剂盒现货供应由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多Bradford蛋白定量试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
Bradford蛋白定量试剂盒现货供应
规格:60次
品牌:百奥莱博
编号:RFT058
产地:国产|进口
● 试剂盒内容及保存:产品名称 包装 贮存方式
考马斯亮蓝G-250染色液 200 ml 4℃
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml) 2×1 ml -20℃
PBS溶液 10 ml 4℃
说明书 1份
● 储存条件和效期:考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存;牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。
● 产品简介:
Bradford蛋白质浓度测定试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合,使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
每个试剂盒可以检测1000个样品(使用微孔板)或60个样品(使用试管)
● 产品特点:1. 检测速度极快,10个样品只需不足10分钟即可完成。
2. 灵敏度高,检测浓度下限可达25μg/ml (测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系),最小检测蛋白量可达0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
3. Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。然而,此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响,故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%,Triton X-100浓度低于0.05%,Tween 20, 60, 80浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(RTP7102)。
● 操作方法
微孔板测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml)
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
2. 1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入80μl PBS溶液,使其终浓度为1 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液:编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA标准溶液 μl 5 mg/ml BSA标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 0.5 2.5 5 10 15 20 6 8
PBS 溶液 μl 20 19.5 17.5 15 10 5 0 14 12
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 20 μl
4. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中,并用PBS补足到20 μl;
5. 向微孔板中加入200 μl G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;
6. 测定595 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7. 以A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
试管测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml)
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
2. 1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取120μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入480μl PBS溶液,使其终浓度为1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液:编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA标准溶液 μl 5 mg/ml BSA标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 5 25 50 100 150 200 60 80
PBS 溶液 μl 200 195 175 150 100 50 0 140 120
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 200 μl
4. 将适当体积的待测样品加入到试管中,并用PBS补足到200 μl;
5. 向试管中加入3ml G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;
6. 测定595 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7. 以A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
除Bradford蛋白定量试剂盒现货供应外,我公司正在打折促销以下产品:
·BL21(DE3)化学感受态细胞
编号:RFT111
规格:20×100ul
储存条件:-70℃冻存六个月
产品简介:本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
BL21(DE3)菌株介绍:特点:(1)T7 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5 启动子,该区整合于BL21 的染色体上。
(2)适用于T7、T7 lac 启动子的表达系统,如pET,pEASY。
(3) 适用于非毒性蛋白的表达。
(4) 使用pUC19 质粒DNA 检测,转化效率可达107 cfu/μg DNA。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置90秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5将离心管内容物混匀,吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16小时。
注:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
注意事项:1. 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
Bradford蛋白定量试剂盒现货供应关键词:Bradford蛋白定量试剂盒,RFT058,百奥莱博
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Bradford蛋白定量试剂盒现货供应关键词:Bradford蛋白定量试剂盒,RFT058,百奥莱博
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