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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
256
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃避光
- 规格:
50ml|100ml
特别提示:包括DAB显色试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:DAB显色试剂盒
产品货号:HR0342
产品规格:50ml|100ml
DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP),用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。
DAB,即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下,DAB 会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB 显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色,也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
用于免疫组化或原位杂交时,如果每个片子使用0.2毫升显色液,那么本试剂盒共可以检测100个片子。
储存条件:-20℃避光保存。
有效期:一年
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用方法:
1.对于组织切片或细胞样品或膜,在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品,在适当固定后,也用适当洗涤液洗涤 3-5次,每次3-5分钟。
2.试剂A和B等量混匀后即配制成DAB染色工作液。
3.zuì后一次洗涤完毕后,去除洗涤液,加入适量DAB染色工作液,确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
5.去除DAB染色工作液,用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。
6.对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色,以便于观察。对于膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。
常见问题分析:
1.背景显色太深。
●在免疫组化时如果背景显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面,请注意选购经过适当吸附的二抗,以减小二抗的非特异性吸附。
●在免疫组化时如果背景显色太深,需注意灭活内源性过氧化氢酶。可以在4 体积甲chún中加入1 体积3%过氧化氢,混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。
●可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间也会有所帮助。
2.没有显色或显色太弱。
●可以考虑适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在膜上,检测二抗是否可以被正常显色。
●可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
●可以适当延长显色时间,另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。
我公司销售的DAB显色试剂盒北京品牌,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验。6)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。7)滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(4℃过夜后在37℃复温45分钟)。8)PBS洗三次每次2分钟。9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃ 20 分钟。10)PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11)滴加试剂SABC,20℃~37℃ 20 分钟。12)PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13)DAB 显色:DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色(镜下掌握显色程度)。14)蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15)脱水、透明
案例一:DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景:奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,第一批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(Santa Cruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了,为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士
抗人CD105单克隆抗体(NeoMarkers),兔抗人CD34、CD31多克隆抗体(Antibody Diagnostica Inc),兔抗人vW因子多克隆抗体(华美公司),抗兔及抗鼠ABC试剂盒、DAB显色试剂盒为华美公司产品,其他试剂均为国产分析纯以上级别。 3、方法: 植块法原代细胞培养: 细胞培养瓶的处理:选用50ml玻璃培养瓶,高压蒸汽灭菌,瓶底铺自制鼠尾胶(制作方法参见2),移入80℃烤箱烤干,临用前用消毒D-Hanks平衡盐缓冲液冲洗3次
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