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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
160
- 英文名:
Bacterial transmembrane protein extraction kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
蛋白酶抑制剂-20℃
- 规格:
50T|100T
特别提示:包括细菌跨膜蛋白提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:细菌跨膜蛋白提取试剂盒
英文名称:Bacterial transmembrane protein extraction kit
产品货号:HR0093
产品规格:50T|100T
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套,因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构,因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
细菌跨膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒。细菌跨膜蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取跨膜蛋白,可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高质量的蛋白提供了保证。该试剂盒提取的蛋白具有天然活性,可用于各种下游实验。
储存条件:蛋白酶抑制剂-20℃保存;蛋白提取液A 2-8℃保存;蛋白提取液B、C室温保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品特点:
1.使用方便,从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
6.本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
7.本品不含 EDTA,可以用于金属螯合层析等下游应用。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法:
1.每500μl抽提液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。
2.将菌液在低温下10000×g离心5分钟,收集菌体,用PBS洗菌体2次。
3.按每20mg湿重菌体样本加入500μl抽提液A(大约菌体和提取液体积比1:2-1:3,完全淹没菌体即可),吹打混匀,振荡1小时(或者冰上放置1-2小时,中间每隔10分钟涡旋振荡混匀)。
4.将菌液在低温下12000×g离心5分钟,取上清。
5.在上清中加入10μl抽提液B,充分混匀。
6.在37℃水浴10分钟。
7.在37℃ 1000×g离心2分钟。
8.此时液体分为2层,移除上层溶液,留管底部下层大约50μl液体。
9.用1-2倍体积溶解液溶解该溶液,即得细菌跨膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进行定量,调整相应的浓度用于下游实验。
我公司销售的细菌跨膜蛋白提取试剂盒报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒操作指南(DP430) ——细菌
以下操作按照天根产品 DP430 细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 细菌培养液,溶菌酶(RT401,客户自备,提取细菌总RNA时需配备。)2. 无水乙醇 ,β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器(DNase I配置),移液器及配套RNase-Free无菌枪头(200 μl ,1ml)1.5 ml,2.0ml 离心管(RNase-free)4. 通风橱 涡旋
musculus),如下图所示:然后我们把这个序列贴到 SOSUI 里面:然后接得到这这些结果:从这个结果我们知道这个蛋白跨膜 7 次,在胞内有两个较大的亚基,因此我们选择裂解液至少也要用 RIPA 而不能用 NP40,否则不能把这个蛋白从细胞膜里面拽出来,或者需要用专门的膜蛋白提取试剂盒来操作。选抗体的时候需要注意一下它的免疫原氨基酸序列是否是胞内的氨基酸序列,因为这样抗体识别的效果是最佳的。然后我们要计算一下 PI,可以用这个工具:输入氨基酸序列之后就得到了分子量和等电点 PI:这个信息对于我们选择哪种
,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
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