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- Acmec
- 上海
- ASE064-0.1ml
- 2025年07月12日
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-20℃
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- 英文名：
Biotin/HRP
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20
- 供应商：
上海吉至生化科技有限公司
- CAS号：
无
- 规格：
,0.1ml
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文献和实验问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。答：1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL，溶液为棕黄色，加入
。 9. 最后，样品加入叠氮钠（终浓度0.5 g/L）及1.0 g/L BSA。将结合产物置4℃，避光保存，亦可加入50%重蒸甘油，置-20℃保存。 要点： 1. 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在，会抑制标记反应。因此，蛋白质在反应前要对0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液或0.5 mol/L 硼酸缓冲液 2. 所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同，选择不当则影响标记的效率，应先用几个不同的分子比来筛选最适条件。
一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤（1）称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。（4）用1M
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