广谱型ELISPOT专用无血清培养基

专业科普：高质量细胞上清液外泌体如何提取

首先，从细胞的培养过程下手。外泌体来自细胞，因此必须先从源头抓起。大部分的细胞培养过程中都是带有血清的，无论是牛血清、马血清等都是含有异源外泌体的，而我们研究的目标通常是细胞所分泌的外泌体，因此需要尽可能的去除这些异源外泌体的干扰。那么我们需要怎么做呢？ 这里需要了解一个大原则：在细胞正常生长的条件下，尽可能的减少血清外泌体或者不使用血清。方法一，可以通过超速离心的方法去除血清中外泌体。方法二，通过外泌体专用无血清培养基来替代完全培养基，维持细胞

细胞上清液提取常见问题解析

。 4、培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？ 多数情况下，细胞在体外培养时需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下两种方法： 将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 >10 h 以去除血清外泌体； 选择无血清完全替代培养基进行细胞培养。 5、无外泌体血清（或者外泌体专用培养基）在什么时候使用？ 使用无外泌体血清培养基：细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞汇合度在60% - 70% 时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基，继续

ELISPOT标准操作程序（protocol）

ELISPOT检测。第二天：接种细胞，加入刺激物，培养（严格注意无菌操作） 整个实验设置1组正对照（PHA刺激），每一个细胞样品（同一个捐献者或实验动物）要设1组负对照（不加刺激物），整块板还要加1组背景负对照（不含细胞，只加培养基和所有检测试剂）。 1、 填好实验卡片，用以指导实验安排及细胞和试剂的添加。每一个细胞/刺激物的组合设复孔（建议2-4孔，客户可根据实验要求自行调整复孔数目）。 2、取出封闭好的板，准备加入细胞。如果是以前做的封闭，先加入200μL的Lympho-Spot™无血清培养基室温