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负20℃
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单克隆
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兽用
我们只做动物疫病产品,我们认真、我们专业!
广州千寻生物技术有限公司依托广东省实验动物监测所新检测技术中心团队,主要关注动保领域。建有动物房、细胞培养间、分子生物学实验室、蛋白实验室等。掌握大肠杆菌、昆虫细胞、CHO细胞表等多个蛋白表达技术。利用蛋白纯化系统制备电泳级纯度的优质抗原,免疫BALB/C小鼠制备并筛选单克隆抗体。
千寻生物销售动物疫病相关抗原和单抗的同时,提供动物疫病相关的蛋白表达、纯化、单抗制备服务。
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文献和实验操作步骤请参阅文献。 Protein A和Protein G法则是近年来单抗纯化的主流方向。这里简单讲述一下它们的纯化原理以及方法。 Protein A是金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白质,分子量为42kD,序列中有6个IgG结合位点,其中5个位点对IgG的Fc片段具有很强的特异亲和力,当达到饱和时,一个Protein A分子平均可以结合两个IgG分子。 目前商品化的Protein A resin(即将Protein A固化在Agarose 或Sephardex微珠上的填料)上的Protein
的基于protein A的填料为2017年上市的Mabselect PrismA (图11),该填料对人IgG可达80 mg/mL的载量,同时0.5 M NaOH清洗300个循环后仍可保持90%以上的载量,载量高,寿命长,使得MabSelect PrismA很快成为目前抗体纯化的首选填料。 图11 基于protein A的填料的发展历程 Protein L可结合kappa类型抗体轻链可变区,因此protein L的填料可用于Fab、ScFV以及Dab等抗体片段的纯化。另外,还有KappaSelect
效应。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定簇的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标
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