一步法高保真RT-PCR MasterMix

特别提示：包括一步法高保真RT-PCR MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法高保真RT-PCR MasterMix
英文名称：5×One-Step HiFi RT-PCR Mix
产品货号：MT0019
产品规格：250T|5000T

本品采用稳定高效的一步法RT-PCR预混体系，以RNA为模板，使用基因特异性反向引物进行反转录反应，获得第一链cDNA，随后使用基因特异性正向引物和反向引物进行PCR扩增，在同一反应体系中一步完成从反转录到PCR的全部过程。扩增产物可直接点样进行电泳检测。5×One-Step HiFi RT-PCR Mix包含了从反转录到PCR的全部试剂组分，包括：耐热M-MLV反转录酶、Rnase Inhibitor、化学修饰的高保真DNA聚合酶、dNTP、绿色Loading染料。其PCR扩增用酶为高保真酶，可轻松扩增2kb以下基因产物，扩增产物除正常电泳检测外，还可连接入平端克隆载体，或直接进行PCR产物测序，确保基因序列的高保真扩增。

特点：
1．55℃进行反转录的MLV反转录酶，能更好的转录含有复杂高级结构的RNA模板。
2．高效便捷的反转录预混体系。
3．高保真扩增。

产品组成：

组分	250T	5000T
5×One-Step HiFi RT-PCR Mix	1ml	20ml

储存：请置于-20℃，可保存3年。

使用方法：

1．按以下组分配制反应液：

加入物	加入量
RNA(病毒DNA/RNA样品直接使用2~10μl）	5-500 ng
5×One-Step HiFi RT-PCR Mix	4μl
基因特异性上游引物（10μM）	0.8μl
基因特异性下游引物（10μM）	0.8μl
RNase-Free H2O	Up to 20μl

注意：过多的RNA 模板量会抑制 PCR 反应，通常模板量需要优化。
2．在PCR 仪上按以下条件进行 RT-PCR 反应:

温度	时间	说明
50℃	10分钟	反转录反应
95℃	15分钟	失活MLV，并激活DNA聚合酶
95℃	20s	35~40 循环
Tm值	20s
72℃	2Kb/min
72℃	2分钟	末端延伸

3．PCR反应结束后，直接进行电泳检测。预混液中已经包含绿色染料，无需再加入DNA Loading Buffer。

除了一步法高保真RT-PCR MasterMix,，我公司还供应以下相关产品：



名称：可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂
货号：BTN60901
规格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是进行PCR的最常用工具酶，但是由于它在常温下还是具有部分活性，所以经常会出现非特异的扩增产物，尤其是当PCR反应体系中有大量非特异DNA存在的时候。目前最常见的解决方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗体和使用经过化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺点是加热后抗体会不可逆失活，后者的缺点是需要预热处理使酶激活。

产品特点：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常温抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能丧失，当温度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢复。
2. 耐热，产品本身为非蛋白质试剂，远比Anti-Taq抗体稳定，便于保存和运输。
3. 使用简单，在加Taq酶前将本产品按PCR反应体积的1/10直接加入即可。
4.适用范围广，除Taq DNA聚合酶外，还可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一种酶的抗体一般对另一种酶的活性没有抑制作用。
5.与后续的RT-PCR兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反应终体积1/10的比例将本产品加入到反应体系中混匀，然后再加入DNA聚合酶，启动PCR反应。

名称：反转录试剂盒
货号：ALH266
规格：50次|100次
本试剂盒是可以除去基因组DNA进行 Real Time RT-PCR 反应的专用反转录试剂。本试剂盒为一管式反转录预混Mix，5 × TRUE RT MasterMix中含有反转录第一链合所需的所有试剂（RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer）。 通常Real Time RT-PCR等实验需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA) ，但是传统DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊 gDNA Eraser 2-5分钟消除gDNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。反转录步骤采用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成，具有更高的检测效率和敏感度。

试剂盒组分(100次)：
gDNA Eraser-——————————————100μl
10×gDNA Eraser Buffer—————————100μl
5×TRUE RT MasterMix——————————400μl
RNase free H2O—————————————2ml

注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. gDNA Eraser 、5 × TRUE RT MasterMix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。gDNA Eraser可以每次按照0.8μl使用，5 × TRUE RT MasterMix可以每次按照3.8μl使用，也不影响使用效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

本制品别名：通用反转录PCR试剂盒|去除基因组DNA反转录PCR试剂盒|通用RT-PCR试剂盒

名称：dUTPase(热稳定)
货号：JN0056
规格：200U×5
  热稳定性dUTPase可以最大限度地提高高保真性PCR效率，可以去除dNTPs溶液和PCR过程中产生的dUTP。在保真PCR反应过程中，dCTP可以自发脱氨基，形成dUTP，PCR产物中掺入dUTP将导致扩增产物突变，具有校正活性的聚合酶活性丧失，不具有校正活性的聚合酶速度减慢。dUTPase可以将dUTP维持在较低水平，防止dUTP的错误掺入。

产品特点：
1、提高PCR产量：由于减少了UTP掺入引起的扩增抑制，能够显著提高pfu酶的扩增产量。
2、提高准确度：由于产量提高，用更少的循环可以获得有效扩增，进而减少突变机会。
3、增加扩增长度：dUTPase的加入促进长片段的扩增。

产品用途：提高PCR扩增的产量；提高长片段扩增效率。

使用建议：耐热dUTPase能够直接加入到PCR反应混合物中用于促进PCR效果。建议使用浓度：每50μl反应体系中加入10单位dUTPase.

活性定义：85℃条件下，缓冲液20mM Hepes pH7.5. 150mM KCl. 5mM MgCl2.体系中1分钟内转化1uM dUTP为 dUMP，定义为1个单位。

质量保证：本品经多次柱纯化，SDS-PAGE电泳检测仅可见清晰单一的目标条带；PCR方法检测物大肠杆菌DNA 残留；无内，外切核酸酶污染。

应用示例：

图例1）dUTPase对扩增产量的影响。
目标片段0.5kb, 1kb, 4kb。
1-3:未添加dUTPase;
4-6: 50μl反应体系中添加10U dUTPase;
M: Marker。

图例2）dUTP对PCR扩增的影响：
1-4：常规PCR反应中分别加入0,0.01%，
0.1%，1% dUTP, PCR反应被显著抑制；
5-8: 上述反应中加入10U dUTPase, 可有效消除dUTP对PCR的影响