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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Phytophthora infestans
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件:
-20度
- 规格:
50次
中文名称:马铃薯晚疫病菌PCR试剂盒
英文名称:Phytophthora infestans
规格:50次
运输:低温
保存:-20度
有效期:一年
货期:一周
产品及特点
1.即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。
3.提供阳性对照,便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳,本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
一.PCR 检测(20 μL 体系)
1.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次)
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm, 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验此属大多寄生,诱发许多重要的植物病害。菌丝产生无限生长的分枝孢子囊梗,梗上产生大量孢子囊,在孢子囊梗生成孢子囊的位置变肿大。马铃薯晚疫病菌(致病疫霉)引起的马铃薯晚疫病,曾导致世界性的马铃薯减产。
大多数人都以为只有人或饲养的宠物会生病,其实植物也会生病,这些病除了由各式各样的虫子咬食所造成的直接伤害外,也有因细菌、真菌、线虫和病毒等四大病原微生物所造成的植物传染病。 对许多以植物维持生计的人来说,植物一生病他们就头痛了,已经有许许多多不同种类看得见的害虫需要防治,再加上肉眼看不见的微生物在旁边搅局,要有好收成实在不容易,严重的话,还会造成可怕的饥荒。像 1845 至 1846 年的爱尔兰大饥荒,就是因为作为主食的马铃薯被晚疫病菌全面攻击所造成的,导致 100 万人饿死
杀菌剂 germicidal agent,bacteriocidalagent,bactericide
7 等)、石碳酸和甲酚等都具有此种作用。此外,在原生质表面等脂性部分溶解后,损害机能的亲脂性物质、如不饱和高级脂肪酸(油酸、亚油酸、亚麻酸)的盐、具有很强的杀菌作用。无机酸和无机强碱亦有杀菌作用。也常使用乙烯化氧气作杀菌剂。在致死性抗菌素方面,已知有许多种类。物质代谢的阻抑剂和酶毒素往往也具有杀菌性,但根据生物体的杀菌机制,溶菌酶、细菌素等一般不称作杀菌剂。防腐剂最重要的是持续作用,不一定要求很强的杀菌作用,属于农药方面的杀菌剂是防治由霉菌(如稻瘟病菌、稻纹枯病菌等)或细菌(如稻白叶枯病菌、马铃薯晚疫病菌
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