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- 百奥莱博
- YT483-XFU
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
307
- 英文名：
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1ml
特别提示：包括DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)
英文名称：Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
产品货号：YT483
产品规格：1ml
本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本品操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
使用说明：
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系：
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果所用的PCR仪没有热盖，滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，zuì好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
储存条件：-20℃，有效期一年。
我公司销售的DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)北京现货，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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