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滤纸酶(FPA)活性检测试剂盒 微量法

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  • ¥2150
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC2655
  • 2026年05月28日
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    • 详细信息
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    • 保存条件

      2-8℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Filter Paper Activity(FPA) Activity Assay Kit

    • 库存

      29

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • 规格

      100管/48样

    滤纸酶(FPA)活性检测试剂盒
    说明书

    微量法
    货号:BC2655
    规格:100T/48S
    产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    试剂一 液体35 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 液体60 mL×1瓶 2-8℃保存
    滤纸条 25 mg×100条 常温保存
    标准品 粉剂×1 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 滤纸条:常温防潮保存。
    2. 标准品:10mg无水葡萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水溶解,配成10 mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8℃保存两周。
    产品说明:
    纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一类酶的总称,它不是单体酶,而是起协同作用的多组分酶系。以不溶性纤维素如滤纸为底物测定的纤维素酶称为滤纸酶,研究滤纸酶活力对纤维素酶总体酶活力的研究的有着重要意义。
    FPA水解滤纸产生还原糖,还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质,通过测定540 nm处吸光值变化可计算得FPA活性。

    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管(2 mL)。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    三、FPA活性计算
    1. 标准曲线的绘制:
    2. 根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(yΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(yΔA测定)带入公式计算样本浓度(xmg/mL
    3. FPA活性的计算:
    (1)按蛋白浓度计算
    酶活定义:每mg蛋白每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
    FPA酶活(U/mg prot=x×V提取÷V提取×Cpr÷T=0.0333x÷Cpr
    (2)按样本质量计算
    酶活定义:每g样品每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
    FPA酶活(U/g 质量)=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W
    (3)按照细胞或细菌数量计算
    酶活定义:每104个细胞每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
    FPA酶活(U/104 cell)=x×V提取÷细胞数量(万个)÷T=0.0333x÷细胞数量(万个)
    (4)按液体体积计算
    酶活定义:每mL样本每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
    FPA酶活(U/mL=x×V÷V÷T=0.0333x
    V提取:提取液(蒸馏水)体积,1 mLV样:加入的样本体积,0.1 mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度自行测定;W:样本质量,gT:反应时间,30 min
    注意事项:
    1. 用干净的镊子取出滤纸条,带手套将滤纸条卷成小卷放入Ep管底部。
    2. 当A或ΔA超过1时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
    3. 显色结束吸取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条,以免带入毛状物,影响测定结果。
    实验实例:
    1. 取0.1g平菇伞部加入1mL蒸馏水,冰浴匀浆后于4℃12000 rpm离心10 min,取上清置于冰上待测。之后按照测定步骤操作,使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.744-0.536=0.208,带入测得标准曲线y=1.0495x-0.1471,计算x=0.3384,按样本质量计算酶活得:
    FPA酶活(U/g质量)=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W=0.113 U/g质量。
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