PE标记小鼠IgG2a同型对照

如何选择合适的流式抗体

指标：确认流式细胞仪能检测多少个通道，流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。如实验者同时检测三个指标，可以在下图中绿色、黄色和红色三个通道中各选一个适当的荧光素标记，FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标选择同一个通道的荧光标记，以防止荧光的重叠和相互干扰，影响最后结果。因此，流式细胞仪的通道越多，同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多。常用荧光标记包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。 4、同型对照的选择： 流式

流式课堂 | 流式对照设置之同型对照

69、CD38 等活化指标，及 IFN-γ、IL-4、IL17A 等细胞因子，则需要设置同型对照，实现阴阳性细胞群的良好区分。 CD4 CD25 （2）在某些特殊情况下，如单核细胞被 PE/Cyanine 7、APC/Cyanine 7 等串联染料标记的抗体染色时，使用同型对照抗体是十分有必要的。单核细胞一般倾向于与 Cyanine7 等染料非特异性结合，使用同型对照抗体有助于获得理想结果。 （3）不清楚抗原表达情况的时候，一定要使用同型对照来界定阴性细胞群。 （4）胞内染色时

流式实验该准备多少管样本？如何设置对照？

接收范围。 一般来说，实验panel有几种荧光，就需要设置几个单阳管。 同型对照（Isotype Control），是指与使用的流式抗体具有相同种属来源、亚型、荧光标记物、使用剂量和浓度，但对目标靶点无特异性结合的抗体。同型对照通常用来消除抗体的非特异性结合造成的背景染色。 FMO 对照是 Fluorescence Minus One（荧光扣除一）的缩写。在多色实验中，可能会出现某些通道信号难以区分的情况，主要原因是其他某个荧光对该通道的干扰很大，不能使用未染色的空白对照或全部用同型对照来设门